AnÃlise da expressÃo e localizaÃÃo subcelular dos homÃlogos TbEIF4G1 e TbEIF4G2 do fator de iniciaÃÃo da traduÃÃo eIF4G de Trypanosoma brucei

AUTOR(ES)

Rodrigo Pontes de Lima

DATA DE PUBLICAÇÃO

2009

RESUMO

Os tripanosomatÃdeos, agentes causadores de enfermidades de impacto mundial, se destacam dos demais eucariotos por apresentarem um conjunto de processos moleculares Ãnicos, inclusive a ausÃncia de controle da sua transcriÃÃo. Dessa forma, o controle de sua expressÃo gÃnica deve ocorrer apÃs a transcriÃÃo. Assim, um ponto importante de controle à a iniciaÃÃo da traduÃÃo, um processo ainda pouco conhecido nos tripanosomatÃdeos. Em eucariotos, de forma geral, esta comeÃa com a ligaÃÃo ao mRNA do complexo eIF4F, formado pelos polipeptÃdeos: eIF4E, eIF4A e eIF4G. A subunidade eIF4G atua como proteÃna estruturadora do complexo se ligando Ãs demais subunidades e a outros fatores de traduÃÃo. Em Trypanosoma brucei foram identificados cinco homÃlogos do eIF4G, conservados em Leishmania major, denominados de TbEIF4G1-5. Este trabalho buscou contribuir com a caracterizaÃÃo dos homÃlogos TbEIF4G1 e TbEIF4G2 a partir da amplficaÃÃo e clonagem dos seus genes, completos e/ou fragmentos contendo seu domÃnio HEAT central, em vetor de expressÃo bacteriano. A anÃlise das sequÃncias clonadas apresentou divergÃncias genÃticas em relaÃÃo Ãs descritas na literatura, mas, a princÃpio, de baixo significado biolÃgico. Em seguida, realizou-se a expressÃo das respectivas proteÃnas recombinantes e obtenÃÃo de soro policlonal em coelhos. Estes soros foram utilizados em ensaios de âwestern-blotâ e imunocitoquÃmica para analisar a expressÃo das proteÃnas nativas e sua localizaÃÃo subcelular. Os mesmos genes foram tambÃm clonados em vetor plasmidial para superexpressÃo da proteÃna recombinante fusionada à EYFP em T. brucei. Observou-se que o TbEIF4G1 à expresso na fase procÃclica, mas à raro ou ausente na sanguÃnea. Jà o TbEIF4G2 à expresso raramente ou ausente em ambas as fases. Ambas as proteÃnas se mostraram exclusivamente citoplasmÃticas, o que reforÃa um papel na traduÃÃo que merece ser melhor estudado com as ferramentas, proteÃnas e anticorpos, produzidos neste estudo

ASSUNTO(S)

doenÃa do sono trypanosomatids genetica eif4g tripanossomÃase africana protein synthesis trypanossoma brucei - clonagem trypanossoma brucei - genÃtica

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