CaracterizaÃÃo de possÃveis homÃlogos aos fatores de iniciaÃÃo da traduÃÃo eIF4G e eIF4A de Leishmania major

AUTOR(ES)

Christian Robson de Souza Reis

DATA DE PUBLICAÇÃO

2004

RESUMO

Em eucariotos, a iniciaÃÃo da traduÃÃo à um processo essencial de regulaÃÃo pÃs-transcricional da expressÃo gÃnica. Neste processo, atuam proteÃnas designadas eIFs (fatores de iniciaÃÃo da traduÃÃo). Destas destaca-se o complexo eIF4F â eIF4E, eIF4A e eIF4G â que permite associar o mRNA ao ribossomo. Identificamos no genoma de Leishmania major seqÃÃncias que apresentam homologia aos componentes do eIF4F. Este trabalho contempla a caracterizaÃÃo de um homÃlogo do eIF4A (LmeIF4A2) e trÃs homÃlogos eIF4G (LmeIF4G1-3). O gene LmeIF4A2 foi clonado, expresso e utilizado na produÃÃo de anticorpos. Ensaios de Western-blot sugeriram nÃo haver expressÃo do LmeIF4A2 na fase promastigota de Leishmania major. Em seguida realizamos construÃÃes com os LmeIF4G1-3, fusionando-os a GST, permitindo a realizaÃÃo de ensaios de pull down visando investigar sua associaÃÃo com as proteÃnas LmeIF4A1-2. O LmeIF4A2 nÃo interage com nenhum dos LmeIF4G1-3 e o LmeIF4A1 interage especificamente com o LmeIF4G3. Em outra etapa produzimos anticorpos contra as proteÃnas LmeIF4G1-3 para avaliar sua expressÃo na forma promastigota do parasita. A expressÃo do LmeIF4G3 foi confirmada, todavia nÃo detectamos a expressÃo dos LmeIF4G1-2. A interaÃÃo eIF4G/eIF4E foi investigada em ensaios onde homÃlogos LmeIF4G1-3 foram incubados a homÃlogos LmeIF4E1-3, para tentar reconstituir parcialmente o complexo eIF4F in vitro, e testados quanto a sua afinidade pelo cap sintÃtico. Estes resultados se mostraram inconclusivos. A utilizaÃÃo de novas abordagens e a caracterizaÃÃo dos demais fatores serà importante na elucidaÃÃo da traduÃÃo nestes protozoÃrios

ASSUNTO(S)

tripanosomatÃdeos (leishmania major) proteÃnas (eif4g â eif4a) parasitologia genetica biossÃntese iniciaÃÃo da traduÃÃo genÃtica molecular sÃntese protÃica

Documentos Relacionados

• CaracterizaÃÃo funcional de homÃlogos ao fator de iniciaÃÃo da traduÃÃo eIF4E de TripanosomatÃdeos
• IdentificaÃÃo e mapeamento de domÃnios de ligaÃÃo de homÃlogos do fator eIF4G de iniciaÃÃo da traduÃÃo de Leishmania major
• AnÃlise da expressÃo e localizaÃÃo subcelular dos homÃlogos TbEIF4G1 e TbEIF4G2 do fator de iniciaÃÃo da traduÃÃo eIF4G de Trypanosoma brucei
• UtilizaÃÃo de abordagens moleculares in vivo no estudo de homÃlogos do fator de iniciaÃÃo da traduÃÃo 4G (eIF4G) de tripanosomatÃdeos
• AnÃlise computacional de candidatos a homÃlogos a fatores de iniciaÃÃo da traduÃÃo em tripanossomatÃdeos