Tropismo tecidual dos genótipos principais de Trypanosoma cruzi em camundongos BALB/c com infecções mistas, não tratados e tratados na fase aguda da infecção, avaliados pela técnica de LSSP-PCR.

Lilian Figueiredo Moreira

A correlação entre a genética do T. cruzi e as formas clínicas da doença de Chagas não está bem estabelecida. Apesar da relação parasito x hospedeiro ser complexa e multifatorial, uma das razões para essa falta de correlação pode ser a freqüente ocorrência de infecções mistas na natureza. Nesse sentido, o principal objetivo desse estudo foi avaliar, por meio da técnica de LSSP-PCR, o impacto de infecções mistas no tropismo tecidual de clones de T. cruzi pertencentes aos genótipos principais 19, 20, 39 e 32 na fase crônica da infecção. Para tal, foram avaliados seis tecidos (coração, músculo esquelético, cólon, baço, bexiga e cérebro) de quatro camundongos BALB/c fêmeas com infecção mista por clones de T. cruzi de cada genótipo principal. Os animais foram inoculados, via IP, com 5.000 tripomastigotas sanguíneos de cada clone, combinados aos pares, totalizando 24 misturas distintas. Esses camundongos foram divididos em dois grupos: não tratados (INT) e tratados (IT) com benzonidazol (BZ) e avaliados comparativamente às respectivas infecções monoclonais (10.000 tripomastigotas sanguíneos). A técnica de PCR detectou o kDNA dos oito clones de T. cruzi em todos os seis tecidos avaliados de animais INT. Após o tratamento houve redução na positividade da PCR especialmente nos animais infectados com clones dos genótipos 32 e 39 em comparação com aqueles infectados com os genótipos 19 e 20. Não foi observada uma associação entre a distância filogenética dos clones e o tropismo tecidual do kDNA do T. cruzi. Entretanto, clones dos genótipos 19 e 20 foram os únicos que apresentaram, durante a fase crônica, positividade na PCR no cérebro e maior positividade na bexiga. A comparação entre a distribuição tecidual do kDNA de clones do T. cruzi em camundongos com infecção mista e monoclonal revelou que na maioria das misturas estudadas, exceto Cuica cl1 + SO3 cl5 (20+39) houve alteração do tropismo tecidual do kDNA nos animais INT e IT. A maioria dos tecidos de animais com infecção mista (INT e IT) apresentou PCR negativa, ao contrário do observado nos animais com infecção monoclonal. Entretanto, a PCR foi positiva em animais infectados com 18/24 misturas. A identificação dos clones presentes nesses tecidos por LSSP-PCR revelou resultados esperados, considerando as infecções monoclonais, na maioria das misturas. Curiosamente, o perfil genético dos clones remanescentes nos tecidos de animais infectados com as misturas OPS21 cl11 + P209 cl1 e OPS21 cl11 + Bug2148 cl1 e tratados demonstrou a presença do clone OPS21 cl1, 100% susceptível ao BZ. Outro resultado interessante foi obtido na caracterização dos clones remanescentes nos tecidos de animais infectados com a mistura SO3 cl5 + IVV cl4 (39+32) tratados com BZ, que revelou um perfil indeterminado não compatível com o esperado para os clones originais utilizados na inoculação. A caracterização por LSSP-PCR e microssatélites dos clones presentes nos tecidos de animais infectados com as misturas que apresentaram alteração no perfil de susceptibilidade ao BZ revelou resultados semelhantes e esperados, considerando as infecções monoclonais, na maioria das misturas. Além disso, a técnica de LSSP-PCR revelou alteração no tropismo tecidual do kDNA dos clones nesses mesmos animais, sugestiva de interação entre os parasitos componentes da mistura. A técnica de LSSP-PCR apresentou maior sensibilidade quando comparada à de microssatélites, sendo capaz de detectar uma maior porcentagem de ambos os clones nos tecidos de animais INT. A identificação por LSSP-PCR dos clones remanescentes nos tecidos de animais considerados curados (TC) e que apresentaram PCR em tecido positiva demonstrou apenas a presença de um clone e os resultados foram semelhantes àqueles encontrados nos animais tratados não curados (TNC), levantando um importante questionamento a respeito do critério de cura na doença de Chagas. Somente clones dos genótipos 19 ou 20 estavam presentes nos tecidos de animais TC e infectados com as combinações genotípicas 19+32, 19+39 e 20+39, exceto na mistura Cuica cl1 + Bug2148 cl1 (20+39), que demonstrou a presença do clone pertencente ao genótipo 39. Os resultados obtidos nesse trabalho revelaram alteração no tropismo tecidual do kDNA do T. cruzi em infecções mistas sugestiva de interações entre os clones da mistura. Os dados em conjunto sugerem que a correlação entre a genética do parasito e as diferentes formas clínicas da doença é ainda mais difícil de ser estabelecida em infecções mistas em relação às infecções monoclonais.

Tropismo tecidual dos genótipos principais de Trypanosoma cruzi em camundongos BALB/c com infecções mistas, não tratados e tratados na fase aguda da infecção, avaliados pela técnica de LSSP-PCR.

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