Utilização da técnica de PCR em tempo real para avaliação de dois métodos de extração de DNA a partir de alimentos

AUTOR(ES)

Branquinho, Maria Regina, Ferreira, Renata Trotta Barroso, Cardarelli-Leite, Paola

FONTE

Food Science and Technology

DATA DE PUBLICAÇÃO

06/02/2012

RESUMO

A extração de DNA é uma etapa crítica na análise de organismos geneticamente modificados em alimentos por PCR em tempo real. Neste trabalho, os métodos CTAB e DNeasy forneceram preparações de DNA em quantidade e com qualidade a partir de amostras de proteína texturizada de soja, fórmula infantil e extrato de soja. Em relação ao Material de Referência Certificado contendo 5% de soja RoundupReady® , nenhum dos métodos forneceu DNA de boa qualidade. Entretanto, o teste de diluição realizado nos extratos de CTAB não demonstrou interferência de substâncias inibidoras. As eficiências das amplificações do alvo lectin não foram estatisticamente diferentes e os coeficientes de correlação (R²) demonstraram alto grau de correlação entre o número de cópias e os valores de Ct. A ANOVA demonstrou ajuste das curvas de regressão e ausência de desvios significativos. As eficiências das amplificações do alvo p35S, utilizando extratos DNeasy, não foram estatisticamente diferentes e os valores de R² ficaram acima de 0,98, sem desvios de linearidade. Dois valores de R², utilizando extratos CTAB, foram menores que 0,98, correspondendo a menor grau de correlação edesvio de linearidade em uma corrida. A análise comparativa dos Cts dos alvos p35S e lectin não demonstrou diferenças significativas entre as curvas analíticas da amplificação de cada alvo.

ASSUNTO(S)

extração de dna organismos geneticamente modificados ogm análise de alimentos pcr em tempo real linearidade

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