Avaliação de três métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação de DNA genômico pela técnica da PCR
AUTOR(ES)
MESQUITA, Ricardo Alves, ANZAI, Evelyn K., OLIVEIRA, Rogério Nogueira, NUNES, Fábio Daumas
FONTE
Pesquisa Odontológica Brasileira
DATA DE PUBLICAÇÃO
2001-12
RESUMO
Existem na literatura vários protocolos para extração de DNA genômico a partir de material fixado em formol e embebido em parafina. A obtenção de DNA genômico é importante para realização de experimentos em biologia molecular, dentre eles a PCR. Este trabalho teve por objetivo otimizar a extração de DNA genômico a partir de material fixado (hiperplasia fibrosa inflamatória) e não-fixado (mucosa bucal normal) em formol, comparando-se três metodologias diferentes: fenol com digestão enzimática, partículas de sílica com e sem digestão enzimática. Para amplificação do DNA pela técnica da PCR, utilizou-se iniciadores para o éxon 7 da citoqueratina humana tipo 14. O sucesso da amplificação foi verificado pela eletroforese do produto em gel de poliacrilamida 8% contendo glicerol 5% corado com prata. Obteve-se amplificação do DNA genômico extraído com fenol/digestão enzimática e com partículas de sílica/digestão enzimática, para ambos tecidos utilizados. O método padronizado tem potencial para auxiliar no diagnóstico histopatológico, assim como no estudo retrospectivo de material de arquivo.
ASSUNTO(S)
dna reação em cadeia por polimerase queratina
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