Lectinas de sementes de Cratylia mollis (cramoll) e de folhas de Bauhinia monandra (bmoll): imobilizaÃÃes e aplicaÃÃes biotecnolÃgicas

AUTOR(ES)

Edilson Gomes de Santana

DATA DE PUBLICAÇÃO

2004

RESUMO

Uma preparaÃÃo contendo as isoformas 1 e 4 da lectina de sementes de Cratylia mollis (Cramoll 1,4) e uma lectina de folhas de Bauhinia monandra (BmoLL) foram previamente purificadas por fracionamento com sulfato de amÃnio seguidos por cromatografia de afinidade em Sephadex G-75 e gel de guar, respectivamente. Cramoll 1,4 foi imobilizada em Sepharose CL-4B ativada com CNBr (Cramoll 1,4-Sepharose) e usada para purificar imunoglobulina A secretÃria (IgAS) de diferentes secreÃÃes humanas. Dacron ferromagnÃtico na forma hidrazida (FDH) foi utilizado como suporte sÃlido para imobilizar Cramoll 1,4 (Cramoll 1,4-Dacron) e BmoLL (BmoLL-Dacron). As lectinas imobilizadas foram usadas para a purificaÃÃo de glicoproteÃnas do colostro humano. Cramoll 1,4 foi adsorvida a contas de Nafion e caracterizada por voltametria cÃclica., Cramoll 1,4-Dacron BmoLL-Dacron e Cramoll 1,4-Sepharose mostraram picos apÃs a eluiÃÃo bioespecÃfica. Os materiais eluidos da coluna de Cramoll 1,4 Sepharose foram submetidos a imunodifusÃo radial simples (SRID) contra Anti-IgA humana. Para a avaliaÃÃo por voltametria cÃclica da interaÃÃo de Cramoll 1,4 com seu carboidrato especÃfico, a lectina foi adsorvida a contas de Nafion e a resposta eletroquÃmica foi obtida usando um sistema de trÃs eletrodos. Uma curva de calibraÃÃo avaliou a concentraÃÃo de glicose. Os picos eluÃdos mostraram bandas com migraÃÃes eletroforÃticas similares Ãs da IgAS do colostro humano em SDS-PAGE: cadeias pesada (H) e leve (L) bem como componente secretor. Os picos eluÃdos da coluna de Cramoll 1,4-Sepharose mostraram anÃis de precipitaÃÃo contra anti-IgA humana. A interaÃÃo entre Cramoll 1,4 e diferentes concentraÃÃes de glicose mostraram picos de reduÃÃo e oxidaÃÃo. Esses picos anÃdicos e catÃdicos diminuÃram com o aumento da concentraÃÃo de glicose. Neste estudo IgAS foi purificada de diferentes secreÃÃes humanas em colunas contendo Cramoll 1,4 Sepharose, utilizando metil-a-D-manopiranosÃdeo glicose como eluente. Cramoll 1,4 e BmoLL e foram capazes de ligarem-se a FDH, podendo ser usadas como matrizes de afinidade para a purificaÃÃo de glicoproteÃnas do colostro humano. O resultado da transferÃncia de elÃtrons da Cramoll 1,4 durante a interaÃÃo com a glicose foi significativo. O sistema pode ser usado como um sensor de calibraÃÃo para determinar glicose

ASSUNTO(S)

voltamogramas cÃclicos dacron, sepharose cl-4b lectinas de folhas de bauhinia monandra (bmoll) imobilizaÃÃo sepharose cl-4b nafion bauhinia monandra leaf lectin (bmoll) cyclic voltammograms purificaÃÃo de igas ciencias biologicas lectinas de sementes de cratylia mollis (cramoll) cratylia mollis seed lectin (cramoll) dacron nafion purification of igas immobilization

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