CaracterizaÃÃo bioquÃmica de bactÃrias psicotrÃficas de tanques de refrigeraÃÃo de leite e formaÃÃo de biofilmes por Pseudomonas fluorescens e Staphylococcus aureus em aÃo inoxidÃvel

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

BactÃrias psicrotrÃficas multiplicam-se no leite cru quando armazenado sob temperatura de refrigeraÃÃo por perÃodos prolongados. Dentre as fontes de contaminaÃÃo destacam-se as falhas nos procedimentos de higienizaÃÃo de superfÃcies e equipamentos, como tanques de resfriamento de leite, que favoreceram a adesÃo e formaÃÃo de biofilme por bactÃrias psicrotrÃficas, que apresentam como caracterÃstica relevante na deterioraÃÃo de alimentos pela produÃÃo de enzimas hidrolÃticas termorresistentes (proteases, lÃpases e lecitinase). A expressÃo das enzimas hidrolÃticas alÃm da formaÃÃo de biofilme e resistÃncia a agentes antimicrobianos à controlada pelo sistema de autoinduÃÃo ou quroum sensing que, em bactÃrias Gram-negativas como Pseudomonas fluorescens e Serratia liquefaciens à regulado pela homoserina lactona acilada (AHL) sendo que, em bactÃrias Gram-positivas como Staphylococcus aureus essa regulaÃÃo ocorre pela sÃntese de peptÃdeos. Pelas observaÃÃes relatadas objetivou-se com esta pesquisa: isolar, identificar e caracterizar, quanto à capacidade de produzir enzimas hidrolÃticas, bactÃrias psicrotrÃficas de tanques coletivos de resfriamento de leite; determinar a susceptibilidade dos isolados identificados a agentes antimicrobianos; detectar a produÃÃo de homoserina lactona acilada em estirpes de S. liquefaciens e P. fluorescens e avaliar a formaÃÃo de biofilme em aÃo inoxidÃvel por S. aureus e P. fluorescens em condiÃÃes de monocultivo e cultivo combinado e determinar a atividade proteolÃtica das cÃlulas aderidas. Foram amostrados por meio de swabs estÃreis 100 cm2 do fundo, 100 cm2 da parede e 100 cm2 da pà de homogeneizaÃÃo de tanques, seguido de diluiÃÃes seriadas e plaqueamento em agar triptona de soja (TSA), com incubaÃÃo a 7Â/7-10 dias, em seguida os isolados foram submetidos a testes bioquÃmicos utilizando-se kits de identificaÃÃo: Bactray I e II e API20NE. Para determinaÃÃo da atividade das enzimas hidrolÃticas utilizou-se o teste de difusÃo em agar. Em seguida, foram selecionadas 2 isolados de P. fluorescens e 6 isolados de S. liquefaciens para avaliar a produÃÃo de AHL, utilizando Agrobacterium tumefaciens A136 como estirpe monitora. Os isolados foram estriados paralelos a estirpe monitora em placa contendo agar lÃria-bertani suplementado com 50 ug/mL de X-Gal e incubados a 28ÂC/24 horas. A formaÃÃo de biofilme por S. aureus e P.fluorescens foi avaliada sob condiÃÃes de monocultivo e cultivo combinado, alÃm da determinaÃÃo da atividade proteolÃtica das cÃlulas aderidas. Foi observada grande diversidade bacteriana entre os isolados com predominÃncia de Pseudomonas sp. dentre aqueles identificados pelo API20NE e de Serratia sp. dentre as bactÃrias identificadas pelo Bactray I e II, a atividade proteolÃtica foi mais pronunciada entre todos os isolados, seguida da atividade lipolÃtica e da lecitinase. A multirresistÃncia aos antibÃticos testados foi observada em 100% dos isolados. A produÃÃo da molÃcula sinalizadora foi observada em todas os isolados. Houve formaÃÃo de biofilme no monocultivo e cultivo combinado por P. fluorescens e S. aureus, sendo que, nas duas condiÃÃes S. aureus apenas aderiu à superfÃcie de aÃo inoxidÃvel. A atividade proteolÃtica foi detectada com mais intensidade em P. fluorescens sendo dependente da alta densidade celular indicando a importÃncia do sistema de quorum sensing em bactÃrias psicrotrÃficas.

ASSUNTO(S)

bactÃrias psicrotrÃficas biofilme ciencia de alimentos serratia liquefaciens enzimas hidrolÃticas homoserina lactona acilada

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