Purificação e caracterização parcial da peroxidase do abacaxi / Partial purification and characterization of peroxidase of pineapple

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

1983

RESUMO

De urna amostra de quatro abacaxis (Ananas comosus (L.) merril) cv Pérola, foram extraldos, por homogenização da polpa, sem adição de água, 2 800 ml de suco. Ao mesmo foi adicionado (NH4}2 504 a uma concentração de 40% de saturação. Após um perIodo de 16 horas de repouso a 40C a amostra foi centrifugada e o precipitado descartado. Ao sobrenadante foi adicionado (NH~}2 504 até 80% de saturação. Após 2lhoras de repouso a 4 C o precipitado foi separado por centrif~ gaçao e em seguida dialisado contra H20 durante 48 horas a 40C e contra tampao fosfato 0,05 M pH 6,0 durante outras 48 horas a 4 C. Após fracionamento com sulfato de amônio a peroxidase foi purificada em colunas de Dietilaminoetil celulose (DEAE-celulose) e carboximetil celulose (CM-celulose) sucessivarnen te. Na cromatografia em DEAE-celulose foram obtidas 5 frações distintas, eluidas com gradiente de NaCl. Em seguida cada uma das cinco frações foi submetida a cromatografia em c~ luna de CM-celulose. Na cromatografia da primeira fração ob tida da coluna de DEAE-celulose (em coluna de eM-celulose) foram obtidas duas frações denominadas fração V e fração VI. Na crornatografia em coluna de CM-celulose de cada uma das outras quatro frações obtidas na cromatografia em coluna de DEAE-celulose, foi obtida uma só fração em cada caso, sendo denominadas frações I, II, III e IV. As 6 frações contendo atividade de peroxidase foram dialisadas e liofilizadas para os estudos posteriores. Para a determinação do pH ótimo de atividade das vã rias isoenzimas da peroxidase do abacaxi foram utilizados os tampões acetato e fosfato. As frações I, II e III apresenta ram um pH ótimo de 5,2; a fração IV apresentou um ótimo de atividade a pH 5,4 e as frações V e VI apresentaram pH ótimo de 5,0. O estudo da estabilidade térmica foi conduzido submetendo-se as diversas frações a tratamentos a 75°, 80°, 85° e 90 C por tempos de 30",1 ,2 e 3 ; sendo logo a seguir d~ terminadas as atividades residuais. Utilizando-se a equação de Arrhenius determinaram-se as energias de inativação que foram da ordem de 23 a 37 kcal/mol para as várias frações

ASSUNTO(S)

tecnicas imunoenzimaticas pineapple technical immunosorbent abacaxi

ACESSO AO ARTIGO

Documentos Relacionados