PurificaÃÃo, imobilizaÃÃo e avaliaÃÃo de propriedades biolÃgicas da lectina da entrecasca de Crataeva tapia

AUTOR(ES)

Regina Maria Sousa de AraÃjo

DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

Lectinas sÃo proteÃnas ou glicoproteÃnas de origem nÃo imune cuja ligaÃÃo reversÃvel e especÃfica a carboidratos resulta em aglutinaÃÃo celular. Estas proteÃnas, presentes em bactÃrias, invertebrados, vertebrados e plantas sÃo detectadas por ensaio de hemaglutinaÃÃo. Crataeva tapia L. pertence à famÃlia das Capparaceae. Uma lectina de entrecasca de C. tapia, CrataBL, foi purificada à homogeneidade atravÃs de fracionamento com sulfato de amÃnio (FraÃÃo 30-60%), seguida por cromatografia de troca iÃnica (CMCelulose). CrataBL aglutinou eritrÃcitos de humanos, galinha e coelho (atividade hemaglutinante especÃfica, AHE, 102) e principalmente inibida por glicoproteÃnas. CrataBL foi termoestÃvel e tratamento com EDTA nÃo afetou a atividade hemaglutinante (AH); atividade nÃo foi alterada apÃs adiÃÃo de Ca2+, Mn2+, Mg2+ e apÃs tratamento com as enzimas proteolÃticas tripsina e quimiotripsina sua AH manteve-se estÃvel. CrataBL migrou como uma Ãnica banda apÃs eletroforese para proteÃnas nativas bÃsicas e duas bandas polipeptÃdicas de massas moleculares 21.000 e 40.000 Da apÃs SDS-PAGE com ou sem agente redutor; os polipeptÃdeos foram tambÃm detectados usando reagente para glicoproteÃna e sua porÃÃo carboidrato foi estimada em 12,8%. A natureza glicoprotÃica de CrataBL foi tambÃm revelada por sua interaÃÃo com lectina glicose/manose em gel de agarose. A massa molecular da lectina por cromatografia de filtraÃÃo em gel foi de 40.000 Da. CrataBL imobilizada em Sepharose CL-4B adsorveu bioseletivamente caseÃna, fetuÃna, ovoalbumina e isolou glicoproteÃnas de plasma sanguÃneo humano. O efeito da lectina na coagulaÃÃo sanguÃnea foi avaliado atravÃs do tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA), tempo de protrombina (TP) e tempo de trombina (TT). CrataBL apresentou atividade anticoagulante somente na via intrÃnseca, onde o TTPA apresentou-se prolongado (dose-dependente) a partir de uma concentraÃÃo de 1,25 μg da lectina. CrataBL apresentou toxicidade para Artemia salina com LC50 de 71,7 μg/mL. A atividade antitumoral de CrataBL (20 mg/kg) foi avaliada utilizando Sarcoma 180 implantado em camundongos albinos Swiss (Mus muscullus) e foi detectada por reduÃÃo do peso do tumor de 50,7%. A atividade antiinflamatÃria de CrataBL foi avaliada pelo modelo de edema de pata induzido por carragenina e a lectina apresentou efeito antiinflamatÃrio significativo evidenciado pela reduÃÃo (35,4%) do nÃmero de neutrÃfilos no exsudato inflamatÃrio. CrataBL tambÃm apresentou atividade analgÃsica reduzindo em 34,8% o nÃmero de contorÃÃes induzidas por Ãcido acÃtico

ASSUNTO(S)

atividade antitumoral atividade antiinflmatÃria e analgÃsica imobilizaÃÃo purificaÃÃo de lectinas purification of lectins anti-inflammatory and analgesic activity immobilization coagulaÃÃo sanguÃnea ciencias biologicas blood coagulation antitumoral activity

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