PurificaÃÃo e CaracterizaÃÃo Parcial de duas Hemorraginas Ativadoras de Fator X da PeÃonha de Bothrops leucurus (jararaca do rabo branco) (Wagler, 1824)

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2006

RESUMO

Hemorragia à uma patologia que ocorre devido à anormalidade das funÃÃes dos fatores da coagulaÃÃo, do endotÃlio dos vasos sanguÃneos e/ou das plaquetas. Enzimas da peÃonha dos ViperÃdeos, designadas hemorraginas, toxinas hemorrÃgicas ou ainda fatores hemorrÃgicos sÃo as principais responsÃveis pelo quadro hemorrÃgico (local e sistÃmico) apresentado nos acidentes por viperÃdeos. A espÃcie Bothrops leucurus à uma das mais importantes serpentes peÃonhentas do Nordeste do Brasil. Neste trabalho foi realizada a purificaÃÃo e caracterizaÃÃo parcial de duas toxinas hemorrÃgicas da peÃonha de Bothrops leucurus. As hemorraginas Bleu-H1 e Bleu-H2 foram purificadas atravÃs de trÃs passos cromatogrÃficos: troca iÃnica de 600 mg da peÃonha de B. leucurus, dividida em quatro alÃquotas, em coluna de Mono Q (10 x 100 mm), seguida de gel em filtraÃÃo TSK G-3000 (7,5 mm x 60 cm) e recromatografia em coluna de Mono Q (5 x 50 mm), obtendo rendimento de 0,1% para cada toxina. Os resultados do dot-blot indicam que ambas hemorraginas sÃo metaloproteases. De acordo com os resultados da SDS-PAGE em condiÃÃes redutoras, BleuâH1 à constituÃda de pelo menos seis cadeias (66, 63, 38, 28, 19 e 17 KDa), enquanto BleuâH2 revelou cinco cadeias (63, 41, 38, 28, 18, 16 kDa), sugerindo que as hemorraginas BleuâH1 e Bleu-H2 apresentem massas moleculares superiores a 278 KDa e 207 KDa, respectivamente. A SDS-PAGE sem a presenÃa de agente redutor confirmou a homogeneidade de Bleu-H1. A Dose MÃnima HemorrÃgica (DMH) da peÃonha de B. leucurus foi 1,96 μg, e a de BleuâH1 e de BleuâH2 foram 1,23 μg e 1,42 μg, respectivamente. BleuâH1 e BleuâH2 apresentaram atividade ativadora de fator X, e capacidade de hidrolisar os substratos cromogÃnicos S-2222 e S-2238, sendo Bleu-H2 consideravelmente mais ativa do que Bleu-H1. Em conclusÃo, duas metaloproteinases Ãcidas da classe P-IV, com baixa atividade hemorrÃgica, alta atividade ativadora de fator X e capacidade de hidrolisar os substratos cromogÃnicos S-2222 e S-2238, denominadas Bleu-H1 e Bleu-H2, foram purificadas da peÃonha de Bothrops leucurus

ASSUNTO(S)

hemorraginas metaloproteases hemorrhagins metaloproteases ophidian venoms activators of factor x anatomia animal ativadores de fator x peÃonhas ofÃdicas

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