PurificaÃÃo e caracterizaÃÃo parcial da lectina de raiz de Bauhinia monandra (BmoRL)

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

Lectinas, proteÃnas que reconhecem especÃfica e reversivelmente carboidratos, podem ser purificadas por cromatografia de afinidade. O gÃnero Bauhinia (Fabaceae) inclui espÃcies nativas ou introduzidas, usadas no tratamento de diabetes. A atividade hemaglutinante (AH) detectada em vÃrias espÃcies de Bauhinia està associada à presenÃa de lectinas. Uma lectina especÃfica para galactose (BmoLL) foi previamente purificada em folhas de B. monandra e disponÃvel em quantidades de miligramas (Coelho &da Silva, Phytochem. Anal., 11, 1-6, 2000). Este trabalho teve por objetivo isolar em elevada pureza uma lectina de raiz de B. monandra (BmoRL), bem como a avaliaÃÃo de sua atividade antimicrobiana frente a fungos fitopatogÃnicos do gÃnero Fusarium. RaÃz secundÃria de B. monandra foi extraÃda com tampÃo citrato-fosfato 10 mM, pH 6,5 (10 %, p/v), contendo NaCl 0,15 M (tampÃo selecionado), por 16 h, a 4 oC. O fracionamento salino foi realizado com sulfato de amÃnio (F 0-60%) durante 4 h, em temperatura ambiente; o precipitado foi dialisado em Ãgua destilada, seguido de tampÃo selecionado. Cromatografia em coluna de gel de guar foi efetuada para purificar a lectina; o suporte foi equilibrado com tampÃo selecionado e a eluiÃÃo da proteÃna foi procedida com galactose 0,05 M em tampÃo selecionado. Eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE, 12%, p/v) revelou a pureza de BmoRL; BmoRL à uma glicoproteÃna, como detectado pela coloraÃÃo com reagente de Schiff. BmoRL apresentou elevada AH especÃfica (AHE) com eritrÃcitos de coelho (17.430) e nÃo foi estimulada em presenÃa de Ãons (Ca+2 e Mg+2). BmoRL revelou melhor AHE com os tampÃes citrato fosfato 10 mM em pH 7,0, contendo NaCl 0,15 M e fosfato de sÃdio 10 mM em pH 6,5 e 7,5. Ensaio em diferentes temperaturas revelou que BmoRL perdeu a atividade a 70 ÂC. BmoRL foi totalmente inibida por D(+)-galactose e D(+)-raffinose; asocaseÃna, ovoalbumina e asialofetuÃna inibiram parcialmente a AH da lectina. Sob condiÃÃes desnaturantes e redutoras, BmoRL apresentou uma Ãnica banda glicosilada, com aparente massa molecular de 26 kDa. BmoRL mostrou atividade contra fungos fitopatogÃnicos, especialmente, F. solani com inibiÃÃo do crescimento de 30%. O perfil cromatogrÃfico de BmoRL indica que uma lectina pode ser purificada de raÃzes secundÃrias de B. monandra com gel de guar, em quantidades de miligramas, com atividade antifÃngica

ASSUNTO(S)

b. monandra atividade anti-fÃgica b. monandra antifungal activity bioquimica lectina lectins

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