Isolamento e caracterização de haloarqueas cultivadas em compostos aromaticos e construção de ferramentas moleculares para o estudo da secreção proteica no Dominio Archaea / Isolation and characterization of haloarqueas grown in aromatics and construction of molecular tools to study the protein secretion in the Domain Archaea

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2003

RESUMO

O metabolismo de compostos aromáticos depende de fatores físico-químicos como temperatura, pH e salinidade, e é bem conhecido e caracterizado em microrganismos mesófilos e em condições ambientais moderadas. No entanto, pouco se conhece sobre o metabolismo desses compostos em ambientes hipersalinos. este trabalho, cinco ambientes hipersalinos foram analisados quanto à presença de arqueas halofílicas capazes de metabolizar compostos aromáticos: Salar de Uyuni (Bolívia), salinas de Cahuil (Chile), salinas de Cabo Rojo (Porto Rico), sabkhas da região do Golfo Pérsico (Arábia Saudita) e Mar Morto (Israel e Jordânia). A estratégia empregada para o enriquecimento e isolamento de arqueas halofílicas capazes de crescer em presença de compostos aromáticos foi bem sucedida. Foram isoladas 12 linhagens capazes de crescer em presença de 1 ,2--benzoantraceno (2 mM) e 44 linhagens capazes de crescer em presença de ácido p-hidroxibenzóico (10 mM) como única fonte de carbono e energia. O isolado MM 17, proveniente de uma amostra de água do Mar Morto, apresentou o melhor resultado de crescimento e foi capaz de degradar completamente os ácidos benzóico (10 mM) e p-hidroxibenzóico (10 mM) após 200 h de cultivo. As análises bioquímica e genética dos isolados, juntamente com a análise dos perfis de lipídeos polares, indicaram que as linhagens estudadas pertencem a pelo menos dois gêneros: Haloferax e Halobacterium. Foi determinada a secreção de uma proteína de alto peso molecular por Haloferax volcanii em resposta à presença de 2 mM 1 ,2-benzoantraceno no meio de cultivo. Com o objetivo de estudar o mecanismo de secreção protéica em haloarqueas, o qual não é completamente entendido_ foram realizadas a clonagem molecular dos genes secD e secY de Haloferax volcanii, a expressão heteróloga em Escherichia coli e a purificação dos produtos gênicos, além de uma tentativa preliminar de obtenção de anticorpos policlonais através da imunização de coelhos

ASSUNTO(S)

aromatics biodegradação microorganismos halofilicos halophilic microorganisms biodegradation compostos aromaticos proteinas

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