IdentificaÃÃo de atividades ATPÃsica e AmilÃsica em larvas de Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792) (Coleoptera: Chrysomelidae: Bruchinae)

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2006

RESUMO

RESUMO GERAL - Atividades enzimÃticas do tipo ATPÃsica e AmilÃsica foram detectadas em larvas do coleÃptero Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792), uma espÃcie de besouro incluÃda na sub-famÃlia Bruchinae, da famÃlia Chrysomelidae e praga do coco babaÃu (Orbinya spp). A atividade ATPÃsica foi isolada por fracionamento com sulfato de amÃnio, de extratos do corpo gorduroso e atividade amilÃsica foi extraÃda por solubilidade em tampÃo de intestino das larvas. Essas atividades foram parcialmente caracterizadas por SDS-PAGE, zimograma, e por parÃmetros cinÃticos como temperatura, efeitos de Ãons metÃlicos, efeitos de ativadores. Os resultados mostraram uma atividade ATPÃsica mais ativa na presenÃa de Ãons Mg2+ e Co2+. Observou-se maior atividade na presenÃa de ATP e leve inibiÃÃo por vanadato. A atividade amilÃsica foi levemente ativada por sacarose, apresentou temperatura Ãtima a 50ÂC e foi ativada em torno de 20% por Ãons cÃlcio e por NaCl a concentraÃÃes 0,5 e 14 mM, respectivamente. As atividades caracterizadas podem ser importantes para determinar estratÃgias para o controle dessa praga do coco da palmeira do babaÃu. RESUMO - CAPÃTULO I - Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792) à uma espÃcie de coleÃptero da sub-famÃlia Bruchinae, famÃlia Chrysomelidae, que possui como principal hospedeiro a palmeira babaÃu (Orbinya spp). O objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar atividade ATPÃsica em larvas de P. nucleorum. O aparelho digestivo das larvas de P. nucleorum foi retirado e o corpo gorduroso foi homogeneizado, imediatamente, em tampÃo imidazol 50 mM pH 7,5 contendo inibidores de protease (Aprotinina 0,2 Âg/mL e Benzamidina 1 mM), sacarore 250 mM e EDTA 1 mM e centrifugado a 15000xg por 30 minutos a 4 ÂC. A fraÃÃo S1 foi fracionada com sulfato de amÃnio a 20 % de saturaÃÃo. A fraÃÃo precipitada (P2) foi ressuspendida em tampÃo Imidazol pH 8,0 contendo EDTA 1 mM e β- mercaptoetanol 0.2 mM e centrifugado. A fraÃÃo P3 foi tratada com ATP 10 mM e MgCl2 5 mM, e centrifugada. A fraÃÃo P4 apresentou atividades Mg-ATPÃsica e Co-ATPÃsica e os principais polipeptÃdios desta fraÃÃo possuem Mr em torno de 180, 54, 43 e 17 kDa. CÃlcio ou cÃlcio/calmodulina nÃo estimularam a atividade Mg-ATPÃsica, e nÃo foi detectado atividade K-EDTA-ATPÃsica. A atividade Mg- ATPÃsica nÃo foi estimulada por outros cÃtions e foi levemente inibida por vanadato. A atividade Mg-GTPÃsica foi cerca de 50% da atividade Mg-ATPÃsica. RESUMO - CAPÃTULO II - Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792) à uma espÃcie de besouro da sub-famÃlia Bruchinae, famÃlia Chrysomelidae e cujo principal hospedeiro sÃo cocos da palmeira babaÃu (Orbinya spp), planta tÃpica de zonas de vÃrzeas e vales de rios. O objetivo desse trabalho foi identificar e caracterizar atividade amilÃsica no intestino de larva de P. nucleorum. Foram retirados o intestino de larvas de P. nucleorum, homogeneizados imediatamente em tampÃo fosfato 50 mM pH 7,5 contendo inibidores de protease (Aprotinina 0,2 Âg/mL e Benzamidina 1 mM) e sacarore 250 mM e EDTA 1 mM. A fraÃÃo solÃvel S1 apresentou maior atividade amilÃsica em relaÃÃo à fraÃÃo precipitada P1 e anÃlise em SDS-PAGE mostrou polipeptÃdios em torno de 62 kDa e entre 12 a 40 kDa nessa fraÃÃo. A fraÃÃo S1 apresentou mÃxima atividade amilÃsica a 50 ÂC. Na presenÃa de cÃlcio 0,5 mm ou cloreto de sÃdio 14 mM, a atividade amilÃsica foi ativada, respectivamente, em 20 e 45 %. A preparaÃÃo com sacarose e EDTA apresentou maior atividade amilÃsica em relaÃÃo à preparaÃÃo sem sacarose e EDTA. Em ambas as preparaÃÃes, observou-se um aumento de atividade quanto armazenada em geladeira, um maior aumento na preparaÃÃo sem sacarose e EDTA.

ASSUNTO(S)

larva babaÃu atpÃsica bruchid genetica amilase bruquÃdeo amilÃsica amylase pachymerus nucleorum atpase atividade babassu activity proteÃnas

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