Fusarium verticillioides : caracterização molecular e detecção em milho através de ensaio imunoenzimático

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2005

RESUMO

Fusarium verticillioides é um patógeno primário de milho e principal produtor de fumonisinas. Este fungo pode causar perdas econômicas significativas para produtores e processadores de grãos, criadores de animais, além de representar sérios riscos à saúde humana e animal. Este trabalho teve como objetivo desenvolver um ensaio imunoenzimático (ELISA) para a detecção de F. verticillioides em amostras de milho, avaliar a correlação entre esta metodologia e técnicas tradicionais de detecção de fungos e fumonisinas, assim como avaliar polimorfismos no gene FUM6 associado à biossíntese de fumonisinas, através de polimorfismo conformacional de fita simples. Os polimorfismos encontrados foram associados à produção de fumonisina B1 (FB1). Para o desenvolvimento do ELISA competitivo indireto, foram obtidos exoantígenos de 8 isolados de F. verticillioides, sendo que os antígenos de 3 isolados (97K, 113F e 162A), devido a maior concentração de proteínas e maior número de bandas protéicas visíveis em eletroforese desnaturante em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), foram selecionados para a produção de anticorpos policlonais. O soro imune anti-97K, com maior título no ELISA indireto (1:12.800) foi escolhido para os ensaios posteriores. Quarenta amostras de milho recém-colhido foram analisadas quanto à concentração de exoantígenos de F. verticillioides, contagem de bolores e leveduras, e determinação de ergosterol e fumonisinas dos grãos, visando avaliar a correlação entre estes parâmetros. F. verticillioides foi também cultivado em meio líquido para a avaliação da correlação entre biomassa e exoantígenos. O perfil eletroforético dos exoantígenos produzidos para o desenvolvimento do ELISA apresentou bandas com massas moleculares aparentes variando entre 17 e 170 kDa. Não foi observada correlação significativa entre exoantígenos determinados por ELISA competitivo indireto e contagem total de bolores e leveduras, contagem de Fusarium spp. e níveis de fumonisinas. Por outro lado, o coeficiente de correlação entre exoantígenos e ergosterol foi 0.52, enquanto que entre biomassa e exoantígenos de F. verticillioides em cultivo em meio líquido foi 0.84. Três isolados de F. verticillioides apresentaram perfil eletroforético diferente dos demais, demonstrando que existe polimorfismo para o loco fum6. O isolado 97J apresentou polimorfismo na região correspondente ao sítio P450 da enzima, enquanto que os isolados 97L e 119Fa apresentaram polimorfismos na região do sítio "FAD-binding 1". A mutação no domínio P450 não parece estar associada ao aumento ou diminuição da produção de fumonisinas, uma vez que o isolado 97K produziu níveis intermediários de FB1 (1050 µg/g), porém os isolados com polimorfismo no domínio "FAD-binding" apresentaram elevada produção de FB1 (2643 e 2814 µg/g respectivamente, para 97L e 119Fa) . Os resultados obtidos sugerem que o ELISA com exoantígenos apresenta potencial para detecção de Fusarium spp. em amostras de milho e que o gene FUM6 pode ser um marcador molecular para linhagens altamente toxigênicas de F. verticillioides.

ASSUNTO(S)

micotoxinas fusarium verticillioides corn fusarium fumonisinas milho fusario mocotoxins

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