Efeito da adição de colesterol e ecdisona na produção in vitro do baculovírus spodoptera frugiperda MNPV

AUTOR(ES)

Graciana Clecia Dantas

DATA DE PUBLICAÇÃO

2010

RESUMO

Dentre as pragas que atacam a cultura do milho no Brasil, destaca-se a Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae), conhecida no estádio larval como lagarta-do-cartucho, considerada a praga chave da cultura, alimentando-se da planta em todas as suas fases de crescimento, principalmente dos cartuchos de plantas jovens. Para seu controle, tem-se empregado inseticidas químicos de amplo espectro, o que tem causado efeitos adversos ao homem e ao meio ambiente. Por essa razão, torna-se necessária a busca de alternativas mais eficientes, de baixo custo e de fácil utilização, como o uso de bioinseticidas, especialmente os baculovírus. Devido à instabilidade genética durante a passagem seriada de baculovírus em cultivo de células de inseto, o desenvolvimento da produção in vitro de bioinseticidas virais é o maior desafio para a sua produção massal. Passagens sucessivas de vírus usando vírus extracelulares (BVs), necessárias para o aumento de escala durante a produção de bioinseticida viral, leva ao aparecimento de formas aberrantes de vírus, processo conhecido como efeito de passagem. A principal consequência do efeito passagem é a diminuição da produção de corpos de oclusão (OB), inviabilizando economicamente sua produção pelo processo in vitro. Neste trabalho, foi realizada a passagem seriada do isolado 18 do baculovírus Spodoptera frugiperda multiple nucleopolyhedrovirus em células Sf21. Foi observada uma queda na produção de OB de 170 para 92 da terceira para quarta passagem. Um planejamento experimental fatorial (22) foi empregado para verificar a influência de duas variáveis de entrada, concentração de hormônio 20- Hidroxiecdisona (CH) e concentração de colesterol (CC), sobre os valores das variáveis de resposta do processo (produção volumétrica e produção específica de OB), procurando definir as faixas ótimas de operação para reverter ou minimizar o efeito passagem. O resultado deste planejamento indicou influência negativa da adição do colesterol e positiva na adição de hormônio, onde as faixas ótimas encontradas para as concentrações estudadas foram: 8 a 10μg/mL e 5 a 6,5μg/mL, para as concentrações de colesterol e hormônio, respectivamente. Novos experimentos foram realizados com a adição individual de hormônio e colesterol com a finalidade de verificar a influência destes adjuvantes na produção de OB de forma independente. No planejamento experimental obteve-se produção volumétrica de 9,4 x 107 OB/mL e específica de 128,4 OB/célula. Quando se adicionou 6 μg/mL de 20-Hidroxiecdisona, as concentrações elevaram-se para 1,9 x 108 OB/mL e 182,9 OB/célula, indicando que a adição do hormônio melhorou a eficiência da produção in vitro de produção de SfMNPV em cultivos de células Sf21

ASSUNTO(S)

bioinseticida baculovirus cultivo de células de inseto sfmnpv colesterol 20- hidroxiecdisona engenharia quimica bioinseticide baculovirus insect cells culture sfmnpv cholesterol 20 hydroxyecdysone

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