Construção da biblioteca de cDNA da glândula de peçonha do escorpião Opisthacanthus cayaporum e clonagem de genes que codificam para componentes da peçonha

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

A peçonha de escorpiões é uma complexa mistura de peptídeos que modulam canais iônicos, antimicrobianos, potencializadores de bradicinina, hemolíticos, e com outras atividades biológicas, sendo importante alvo de estudos para o desenvolvimento de novos fármacos. Os estudos de caracterização proteômica, principalmente com escorpiões da família Buthidae, têm descrito várias toxinas, contudo há pouco conhecimento sobre os processos celulares da glândula de peçonha. A metodologia de busca por ESTs tem sido utilizada em vários trabalhos porque é um método rápido e confiável para a detecção dos genes expressos na glândula, que sintetizam produtos conhecidos ou não. O presente trabalho é o primeiro estudo de caracterização dos transcritos da glândula de peçonha do escorpião brasileiro Opisthacanthus cayaporum (Ischnuridae), por meio da construção de uma biblioteca de cDNA. Foram analisadas 130 ESTs, resultando em 67 seqüências de nucleotídeos distintas com alta qualidade, sendo formadas por em média 535 pares de bases (variando entre 139 e 902 nucleotídeos). Das 130 ESTs, 30% são prováveis toxinas de O. cayaporum, (7 contigs e 8 singletos), 36% correspondem a proteínas relacionadas a diferentes processos celulares (16 singletos e 4 contigs), 17% são seqüências que não foi possível atribuir função, pois apresentaram expectância >10-5, 15% seqüências que não foi encontrada identidade com peptídeos depositados no GenBank e 6% correspondem a seqüências caracterizadas de genomas. Foram descritas 15 seqüências distintas com identidade a toxinas, sendo 9 semelhantes à toxinas bloqueadoras de canais para potássio, 4 toxinas sem pontes dissulfeto e com atividade antimicrobiana e 2 seqüências com identidade a fosfolipases. As seqüências de aminoácidos obtidas a partir da caracterização da biblioteca de cDNA, neste trabalha, apresentaram distribuição de massas moleculares semelhante àquelas descrita pela análise proteômica de O. cayaporum. A seqüência nomeada Cayaporina (NDBP 3.7), de massa teórica calculada de 4675 Da, foi purificada da peçonha bruta e teve sua seqüência de aminoácidos obtida por seqüenciamento de novo e por degradação de Edman. Esse peptídeo possui atividade antimicrobiana contra Escherichia coli, em concentração de 28μM e também inibiu o crescimento em 56% de Staphylococcus aureus, não tendo atividade hemolítica em hemácias humanas. Este trabalho demonstrou a riqueza e diversidade de componentes da peçonha dessa espécie, e foi caracterizado o primeiro peptídeo antimicrobiano não hemolítico isolado da peçonha de O. cayaporum.

ASSUNTO(S)

peptídeos antimicrobianos biologia geral transcriptoma biblioteca de cdna transcriptome antimicrobial peptide opisthacanthus cayaporum opisthacanthus cayaporum cdna library

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