Clonagem e expressão do gene da toxina épsilon de clostridium perfringens tipo D e sua aplicação na imunização de animais

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

A toxina épsilon é produzida pelo Clostridium perfringens tipos B ou D, sendo responsável pela enterotoxemia em ovinos, caprinos e bovinos. A doença é de caráter agudo ou super agudo, causando morte súbita e grandes perdas econômicas. A evolução da doença dificulta qualquer medida terapêutica, e o processo pode ser prevenido através de imunizações com vacinas comprovadamente eficientes. O gene etx, que codifica a toxina épsilon, foi clonado no plasmídeo TOPO TA e subclonado em pET-11a, utilizando a linhagem de Escherichia coli BL21 (DE3), para a expressão do gene da toxina épsilon de C. perfringens tipo D. A toxina épsilon recombinante foi expressa, principalmente, na forma insolúvel, retida em corpos de inclusão, e, a dosagem, realizada por SDS-PAGE comparativamente com quantidades conhecidas de BSA, foi estimada em 10 mg/mL, com título em camundongo (M. musculus) de 25 x 102 DL50/mL. Os resultados foram confirmados pelo teste de soroproteção e soroneutralização cruzada em camundongos (M. musculus). Coelhos foram imunizados com 200, 100 e 50 µg da fração insolúvel da proteína recombinante, para o teste de potência, utilizando suspensão de hidróxido de alumínio como adjuvante, obtendo títulos de 40, 30 e 10 UI/mL, respectivamente. Esses valores foram superiores aos níveis de 5 UI/mL, exigido pela Farmacopéia Européia (1998), e, 2 UI/mL, exigido pelo Code of Federal Regulation/USA. A toxina épsilon recombinante produzida neste trabalho mostrou-se uma forte candidata para a produção de uma vacina contra enterotoxemia causada pela toxina épsilon de C. perfringens tipo D

ASSUNTO(S)

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