Seleção de colônias de Clostridium perfringens tipo D produtoras de toxina épsilon por "dot blot"

AUTOR(ES)

Luciana Aramuni Goncalves

DATA DE PUBLICAÇÃO

2004

RESUMO

Para seleção de amostras de Clostridium perfringens tipo D produtoras de toxina épsilon, padronizou-se o teste de dot blot com toxina épsilon adsorvida em membrana de nitrocelulose, anti-toxina épsilon, produzida em carneiro e anti-imunoglobulina de carneiro, produzida em coelho, marcada com peroxidase. A reação foi revelada utilizando-se Kit Substrato DAB 3,3 diaminobenzidina, e a leitura foi feita visualmente de acordo com a intensidade de cor obtida em cada poço. Foram selecionados clones produtores de toxina épsilon obtidos de unidades formadoras de colônias e, após três passagens, obteve-se títulos em dose mínima mortal (DMM) determinado em camundongos, 1000 vezes superiores aos obtidos com a amostra original. A presença do gene etx que codifica a síntese da toxina épsilon foi verificada pela reação em cadeia da polimerase (PCR) e todos os clones foram positivos, mesmo aqueles negativos ao dot blot. O teste de dot blot mostrou-se eficiente para selecionar colônias toxigênicas de C. perfringens tipo D.

ASSUNTO(S)

clostridium perfringens teses. clostridium toxinas teses.

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