Alternative methods for purification of capsular polysaccharide produced by Haemophilus influenzae type b. / Métodos alternativos de purificação do polissacarídeo capsular de Haemophilus influenzae tipo b.

AUTOR(ES)

Silvia Maria Ferreira Albani

DATA DE PUBLICAÇÃO

2009

RESUMO

Haemophilus influenzae tipo b é uma bactéria Gram-negativa, patogênica causadora de meningites em crianças. A cápsula polissacarídica (PSb) é o principal fator de virulência e é usado como antígeno vacinal. O método clássico de purificação do PSb envolve várias etapas de precipitação com etanol, fenol e detergente catiônico (inflamável, corrosivo e tóxico), e etapas de ultracentrifugação. O objetivo deste estudo foi substituir total ou parcial as precipitações e/ou uso das centrífugas por cromatografia, digestão enzimática, microfiltração e ultrafiltração tangencial. As cromatografias de troca iônica e de filtração em gel não apresentaram boas purificações, entretanto a hidrofóbica pode eliminar as proteínas contaminantes. As precipitações com etanol foram necessárias para obter a pureza requerida. O etanol de alguma forma favoreceu a ação enzimática e facilitou a posterior ultrafiltração. A separação com etanol em fibra-oca de microfiltração tangencial mostrou melhores purificações do que a centrifugação, mas com uso repetido verificou-se redução na eficiência.

ASSUNTO(S)

haemophilus influenzae tipo b tangencial microfiltration microfiltração tangencial tangencial ultrafiltration haemophilus influenzae type b purificação de polissacarídeo chromatography polysaccharide purification cromatografia ultrafiltração tangencial enzymatic digestion hidrólise enzimática

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