Vitrificação de folículos ovarianos pré-antrais de fêmeas bovinas com dimetilsulfóxido e sacarose acrescida de α-tocoferol / Cryopreservation of preantral ovarian follicles of cows with dimethylsulfoxide and sucrose plus α-tocopherol

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

22/02/2010

RESUMO

Objetivou-se realizar a vitrificação de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) de fêmeas bovinas com dimetilsulfóxido (DMSO) e sacarose (SAC) acrescida de α-tocoferol (TOC), avaliando a morfologia de FOPA in situ e a viabilidade de FOPA isolados pós-vitrificação. O estudo foi realizado no Laboratório de Reprodução Animal do Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Viçosa. Foram utilizados ovários coletados de fêmeas bovinas abatidas, sem raça e idade definidas e em diferentes fases do ciclo estral. As variáveis qualitativas relacionadas à morfologia e viabilidade do FOPA foram submetidas ao teste não-paramétrico de Kruskal-wallis e teste de qui-quadrado respectivamente, a 5 % de probabilidade. No primeiro experimento utilizou-se 66 ovários de fêmeas bovinas, foram feitos cortes de 5 mm3 aproximadamente. Os fragmentos foram distribuídos aleatoriamente em nove tratamentos, representados pelo controle (fixado a fresco) e quatro soluções de vitrificação (SV) com dois tipos de descongelamento cada, representados da seguinte maneira: SV1m: DMSO, com descongelamento em meio essencial mínimo (MEM); SV1s: DMSO, com descongelamento em SAC; SV2m: DMSO + SAC, com descongelamento em MEM; SV2s: DMSO + SAC, com descongelamento em SAC; SV3m: DMSO + SAC + TOC 5 mM, com descongelamento em MEM; SV3s: DMSO + SAC + TOC 5 mM, com descongelamento em SAC e SV4m: DMSO + SAC + TOC 10 mM, com descongelamento em MEM; SV4s: DMSO + SAC + TOC 10 Mm, com descongelamento em SAC. Cada corte, após o descongelamento, foi fixado para histologia clássica e corado com eosina e hematoxilina sendo observado ao microscópio óptico em aumento de 400x. Analisou-se 13.500 FOPA, encontrando-se 6,238 primordiais, 6,812 primários e 450 secundários, e classificados em: bom, regular ou ruim. Concluiu-se que o DMSO, SAC e TOC podem ser utilizados na criopreservação de FOPA de fêmeas bovinas, recomendando-se trabalhar com DMSO, SAC e TOC 10 mM com descongelamento em MEM, e DMSO com SAC descongelado tanto com MEM quanto com SAC para criopreservar o FOPA in situ. No segundo experimento, foram utilizados 51 ovários de fêmeas bovinas, os cortes, tratamentos, criopreservação e descongelamento como descrito no primeiro experimento. Após o descongelamento, os fragmentos foram dissociados mecanicamente com meio de manutenção M199 e 5 % de albumina sérica bovina para filtração e posterior obtenção de FOPA isolados. A viabilidade dos FOPA foi examinada com azul de Trypan, mortos e vivos, corados ou não-corados, respectivamente, e observados ao microscópio invertido em aumento de 400x. Analisou-se 1500 FOPA isolados por tratamento, e um total de 13.500 folículos foram observados. Os resultados mostraram que o controle, ou seja, FOPA isolados sem vitrificação, diferiram de todos os tratamentos de criopreservação, mostrando assim que a criopreservação prejudica a viabilidade dos FOPA isolados. Porém, entre os tratamentos de vitrificação, o DMSO, SAC e TOC 10 mM, independentemente do tipo de descongelamento, mostraram os melhores resultados de viabilidade pós-criopreservação.

ASSUNTO(S)

vacas criopreservação ovários folículos reproducao animal follicles ovaries cryopreservation cows

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