Evaluation of antigens of Mycobacterium tuberculosis with potential for use in the diagnosis of tuberculosis / Avaliação de antígenos de Mycobacterium tuberculosis com potencial para uso no diagnóstico da tuberculose

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

Tuberculose, causada pela bactéria Mycobacterium tuberculosis, é uma das mais graves doenças infecciosas no mundo, sendo responsável por milhões de mortes. Apesar do uso da vacinação com M. bovis BCG, o número de novos casos continua elevado. Métodos imunológicos para diagnóstico de tuberculose são limitados devido à reação cruzada desencadeada pelo BCG. Novas ferramentas diagnósticas permitiriam a detecção e tratamento de pacientes infectados antes do desenvolvimento da doença ativa, necessitando para isso antígenos presentes em M. tuberculosis, mas ausentes na cepa vacinal. Neste sentido, esse trabalho foi desenvolvido visando à caracterização das proteínas Rv3402, Rv3404 e Rv3405, contidas na RD16, região ausente apenas M. bovis BCG Moreau, a cepa vacinal utilizada no Brasil, mas presente em todas as outras cepas de BCG e em M. tuberculosis. Os genes rv3402, rv3404 e rv3405 foram obtidos por PCR a partir de M. tuberculosis H37RV e clonados no vetor pENTR/D/Topo (Gateway System - Invitrogen) e usados para transformar Escherichia Coli Top10F. A seqüência codificadora de cada gene foi então transferida para o vetor de expressão pDEST17, o qual permite a fusão da proteína com uma cauda de histidina, facilitando a sua purificação. Depois de extraídos e purificados, esses plasmídios foram usados para transformar E. coli BL21 pLysS. A purificação das proteínas foi realizada através de cromatografia de afinidade. Camundongos BALB/c foram imunizados com as proteínas purificadas e o soro obtido destes animais foi utilizado para caracterização das proteínas por Western blot e ELISA. Foi possível demonstrar que as proteínas são imunogênicas e que são expressas por M. tuberculosis. As proteínas contidas na RD16 e avaliadas nesse estudo, foram quantificadas em uma concentração de 0,5 mg.mL-1 para Rv3402 e Rv3404 e 0,2 mg.mL-1 para Rv3405 e foram capazes de induzir uma resposta imune humoral específica e estatisticamente significativa em camundongos imunizados, indicando que podem vir a ser utilizadas para o desenvolvimento de testes de imunodiagnósticos para tuberculose, visando à diferenciação entre indivíduos vacinados e infectados com o bacilo da tuberculose.

ASSUNTO(S)

immune diagnostic tuberculosis tuberculose rd16 rd16 imunodiagnóstico imunologia

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