Transferência de genes heterólogos para células corneanas epiteliais primárias utilizando vetor lentivírus

AUTOR(ES)

Oliveira, Lauro Augusto de, Kim, Charles, Sousa, Luciene Barbosa de, Schwab, Ivan R., Rosenblatt, Mark I.

FONTE

Arquivos Brasileiros de Oftalmologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

2010-10

RESUMO

OBJETIVO: Avaliar a transferência de genes heterólogos expressando a proteína "Green Fluorescent Protein" (GFP) para células corneanas epiteliais primárias ex vivo utilizando vetor lentivírus. MÉTODOS: Tecido corneoescleral de coelhos foi usado para obtenção de suspensão de células corneanas epitelias. As células foram semeadas na densidade de 5×10³ células/cm² e expandidas por 5 dias até uma confluência de 70-80% antes de serem transduzidas. A transferência genética foi monitorada por microscopia fluorescente e por um separador de células ativadas por fluorescência. Foram avaliadas a eficiência de transdução ao longo do tempo e o efeito dose-resposta de diferentes quantidades de partículas virais. Um grupo de células foi analisado pelo separador de células ativadas por fluorescência para avaliar a transdução de células com fenótipo de células tronco do epitélio corneano (baseado na exclusão do corante "Hoechst dye"). RESULTADOS: Os vetores lentivírus foram efetivos na transdução de células corneanas epiteliais primárias de coelhos ex vivo. Fotodocumentação das células vivas demonstrou células epiteliais de morfologia normal e expressando o gene fluorescente (GFP). A eficiência de transdução ao longo do tempo foi maior no quinto dia após a transdução (14,1%) e demonstrou uma tendência à estabilidade a partir do oitavo dia após a transdução. O número de células transduzidas foi dose-dependente e atingiu 7% com as maiores concentrações de partículas virais. Quando analisadas pelo separador de células ativadas por fluorescência para detecção de células transduzidas e também de células que excluíram o corante "Hoechst dye", foi detectado que células com fenótipo de células tronco do epitélio corneano ("side-population") também foram transduzidas. CONCLUSÕES: Os vetores lentivirais podem transferir genes heterolólogos para células corneanas epiteliais primárias expandidas ex vivo de forma eficiente. Os genes foram expressos de forma estável ao longo do tempo e puderam ser transferidos tanto para células epiteliais maduras como para presumíveis células tronco epiteliais. A eficiência de transdução foi obtida de forma dose-dependente.

ASSUNTO(S)

terapia de genes doenças da córnea lentivírus trangenes células tronco epitélio anterior expressão gênica

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