Respostas das células-tronco mesenquimais humanas isoladas de tecido adiposo ao óxido nítrico - análise do transcritoma / Responses of mesenchymal stem cells isolated from human adipose tissue nitric oxide - analysis of the transcriptome

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

As células-tronco mesenquimais (MSC) são células-tronco adultas multipotentes que, sob determinados estímulos, podem se diferenciar para produzir um tipo celular especializado. Estas células apresentam uma freqüência muito baixa nos tecidos, porém apresentam características que as capacitam para várias aplicações clínicas como a engenharia tecidual e a medicina regenerativa. As células-tronco adultas têm sido usadas para recuperação da função cardíaca, entretanto, a pré-diferenciação das células em uma linhagem cardíaca antes do transplante pode evitar um tipo tecidual não desejado no local do transplante. Recentemente, foi demonstrado o envolvimento do óxido nítrico na cardiomiogênese a partir de célulastronco embrionárias. Apesar dessas informações potencialmente promissoras para a diferenciação de células embrionárias pelo óxido nítrico, ainda não há descrição do seu possível papel na diferenciação de células mesenquimais. O objetivo deste trabalho é estudar o efeito do óxido nítrico no potencial de diferenciação de células-tronco mesenquimais, utilizando o microarranjo como ferramenta para uma análise global das alterações dos programas de expressão gênica. Células-tronco mesenquimais provenientes de tecido adiposo foram cultivadas e tratadas com doadores de óxido nítrico, SNAP ou DEA/NONOate. Foi utilizado também 5-azacitidina, um indutor a cardiomiócitos descrito na literatura, assim como um controle negativo sem indutor. Ao longo dos tratamentos, não foram observadas células contráteis nem com fenótipo semelhante, em nível macroscópico, com nenhum dos indutores. O RNA destas células foi extraído após 2, 7 e 20 dias de cultivo e três pools, com RNA proveniente de 2 doadores cada, foram obtidos. Em seguida, foi sintetizado cDNA, cRNA e cDNA biotinilado para hibridar em Genechip Ò Human Gene 1.0 ST (Affymetrix). Análises por PCA e por agrupamento hierárquico mostraram que há uma grande variabilidade biológica entre os pacientes. As análises por agrupamento hierárquico dos genes diferencialmente expressos mostraram dois grupos principais. Um dos clusters agrupou os tempos de tratamento de 2 dias, enquanto o outro agrupou os tempos 7 e 20 dias. Quanto ao agrupamento dos genes, dois grupos podem ser ressaltados. O primeiro grupo é formado por genes que diminuem no tempo 2 dias e tendem a aumentar nos demais tempos. Já o segundo, possui um padrão inverso, sendo formado por genes que aumentam no tempo 2 dias e tendem a diminuir nos demais tempos, sugerindo que há modificações importantes na expressão gênica entre o segundo e sétimo dia. Poucas vias foram moduladas em células submetidas aos diferentes tratamentos. Além disso, não foram observadas vias relacionadas à cardiomiogênese em células tratadas com azacitidina. Nenhum gene relacionado à cardiomiogênese foi modulado tanto em SNAP quanto em DEA/NONOate. Levando em consideração as diferenças existentes entre células-tronco embrionárias e adultas, pode ser que as últimas precisem de algumas adaptações nos protocolos de indução, como um tempo mais prolongado de tratamento, ou que a heterogeneidade da população de células adutas não permita alcançar taxas eficientes de diferenciação.

ASSUNTO(S)

citologia e biologia celular genes células-tronco células-tronco mesenquimais nitric oxide Óxido nítrico mesenchymal stem cells stem cells genes

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