Purificação e caracterização parcial de uma B-D glicosidade de Artemia franciscana com ação sobre celobiose e lactose

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

-D-glicosidase (EC 3.2.1.21) é uma das mais interessantes glicosidases, especialmente por hidrolisar celobiose liberando glicose, último passo de degradação de celulose. Esta função faz com que a -D-glicosidase seja de grande interesse como um versátil biocatalizador industrial, sendo critica para vários processos de bio-tratamento / biorrefinaria, como produção de bioetanol. Neste trabalho, uma -D-glicosidase extraída de extratos protéicos do invertebrado marinho Artemia franciscana foi purificada e caracterizada com uma combinação de precipitação com sulfato de amônio (30; 50; 80%), a fração saturada na faixa de 50% (chamada F-II) foi aplicada em uma cromatografia de exclusão molecular em Sephacryl S-200, as frações correspondentes ao primeiro pico de atividade da -D-glicosidase foram reunidas e aplicadas numa cromatografia de troca iônica em Mono Q; o terceiro pico protéico obtido nessa cromatografia, o qual coincide com o pico de atividade da -D-glicosidase, foi reunido e aplicado numa cromatografia gel filtração Superose 12 onde o primeiro pico protéico, o qual possui atividade da -D-glicosidase, foi recromatografado em Superose 12. Esta enzima provavelmente é multimerica, constituída por três subunidades, de massa molecular de 52,7 kDa (determinado por SDS-PAGE) e com massa molecular nativa de 157 kDa (determinado por cromatografia gel filtração em Superose 12 sob o sistema FPLC). A enzima foi purificada 44,09 vezes com uma recuperação de 1,01%. Utilizando-se -nitrofenil--D-glicopiranosídeo como substrato obtivemos uma Km aparente de 0,229 mM (12,7 M de produto/cm/hora) e Vmáx de 1,109 mM.60min-1.mL-1. O pH ótimo e a temperatura ótima de catálise do substrato sintético foram 5,0 e 45C, respectivamente. A atividade -D-glicosidásica foi fortemente inibida por nitrato de prata e N-etilmaleimida, esta inibição indica o envolvimento de radicais sulfidrila na hidrólise do substrato sintético. A -D-glicosidase de Artemia franciscana apresentou ação degradativa sobre celobiose, lactose e sobre o substrato sintético -nitrofenil--D-glicopiranosídeo, indicando potencial uso desta enzima na indústria principalmente para produção de bioetanol (produção de álcool a parti de celulose) e produção de leite hidrolisado (leite destituído de lactose)

ASSUNTO(S)

invertebrate celulose cellulose bioetanol bioethanol glicosidases bioquimica lactose glucosidases lactose invertebrados

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