Purificação e caracterização de uma fosfolipase A2 do veneno amarelo de serpentes Crotalus durissus collilinetaus / Purification and characterization of a phospholipase A2 from the venom of Crotalus durissus yellow collilinetaus

AUTOR(ES)

Pedro Henrique Camargo Santana

DATA DE PUBLICAÇÃO

2009

RESUMO

No Brasil, a serpente Crotalus durissus collilineatus é muito estudada, devido a sua importância médica, já que é uma das responsáveis pelo envenenamento crotálico. A crotoxina é o componente mais tóxico do veneno das cascavéis sulamericanas da espécie Crotalus durissus. É composta por duas diferentes subunidades, a crotapotina (componente ácido) e uma fosfolipase A2 (componente básico). As fosfolipases A2 é a enzima mais estudada destes venenos, sendo a maior responsável por sua toxicidade. Dentre seus principais efeitos estão os efeitos neurotóxico, miotóxico, citotóxico, agregação plaquetária, anti-coagulante e bactericída. Este estudo tem como objetivo caracterizar uma nova fosfolipase A2 isolada de Crotalus durissus collilineatus, e utilizá-la como modelo para estudos de compostos com potencial antinflamatório. Amostras do veneno bruto de Crotalus durissus collilineatus foram aplicados em uma coluna C18 semipreparativa acoplada a um sistema HPLC. Foram obtidas 20 picos de proteínas/peptídios, sendo que a maior atividade de fofolipase (PLA) foi detectada na fração 14. Esta fração foi submetida a uma nova etapa cromatográfica, em coluna C18 analítica, resultando no isolamento de uma nova PLA. Através de eletroforese, SDS-PAGE a enzima apresentou alto grau de pureza, com massa molecular em torno de 13 kDa. A PLA2 apresentou atividade ótima em pH de 8,2 e temperatura entre 35-40 C, e se mantendo estável em temperaturas de até 60 C. De acordo com nossos experimentos a PLA isolada foi inibida Ca2+, e a atividade não foi alterada por Cu2+. Extrato de manacá, ácido elágico e quercetina inibiram fortemente a PLA, mostrando que esta enzima tem potencial para a seleção de compostos com potencial antiinflamatório.

ASSUNTO(S)

enzimologia enzyme snake enzima 1.serpentes - toxinas 2.serpentes - enzimas 3.serpentes peçonhentas serpente toxin toxina

Documentos Relacionados

• Purificação e caracterização de uma fosfolipase A2 do veneno amarelo de serpentes Crotalus durissus collilinetaus
• Physicoquemical and biologic characterization of phospholipase A2 isolated from Bothrops moojeni venom
• Caracterização funcional e estrutural de uma fosfolipase A2 ácida isolada do veneno de Bothrops pirajai
• Efeitos do veneno de Crotalus durissus terrificus, da crotoxina e de suas subunidades fosfolipase A2 e crotapotina em monocamadas de células endoteliais em cultura.
• Purificação de isoformas de fosfolipase A2 a partir do veneno total de Crotalus durissus terrificus e estudo de seus efeitos em mitocondrias isoladas