Purificação e caracterização da pirofosfatase inorganica de germen de milho

AUTOR(ES)

Maria Elvira Gama Brandão

DATA DE PUBLICAÇÃO

1991

RESUMO

A pirofosfatase inorgânica foi purificada do gérmen de milho cerca de 174 vezes, com rendimento de 2,6% utilizando-se centrifugações diferenciais, saturação fracionada com sulfato de amônio e cromatografias em DEAE-sephadex. Com a enzima parcialmente purificada foram determinadas as condições ótimas de reação de hidrólise do Ppi: 2 mM Ppi, 5 mM Mg2+, pH=8,3. O valor da Km aparente obtido para o Ppi foi de 59uM. A enzima é bastante específica para o Ppi e Mg2+. Observou-se que outros cátions não servem como cofatores, sendo que Ca2+ é um forte inibidor. Cátions polivalentes como as poliaminas também não substituem o Mg2+ na reação. Com relação aos cátions monovalentes. Observou-se uma inibição de 40% em presença de 100 mM de Li+. A reação catalisada pela pirofosfatase inorgânica de gérmen de milho não foi significativamente afetada por reagentes sulfidrílicos como o NEM e o DTNB. Ppi ou Mg2+, isoladamente, não protege a enzima de inativação térmica à 55 ºC. Dois valores diferentes de energia de ativação, 10165 cal/mol e 16715 cal/mol foram obtidos utilizando-se equação de Arrhenius...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital.

ASSUNTO(S)

bioquimica enzimas

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