Purificação, caracterização e efeitos imunomodulatório e antiproliferativo de uma lectina do fungo Clavaria cristata (Holmsk.) Pers

AUTOR(ES)

Dayse Caroline Severiano da Cunha

DATA DE PUBLICAÇÃO

2010

RESUMO

Uma lectina de 140,0 kDa foi purificada e caracterizada a partir do extrato protéico do fungo Clavaria cristata. O processo de purificação a partir do extrato bruto do fungo compreendeu uma cromatografia de gel filtração SEPHACRYL S200 e uma cromatografia de troca iônica Resource Q em sistema FPLC-AKTA (Fast Protein Liquid Chromatography). A lectina de C. cristata (CcL) aglutinou todos os tipos de eritrócitos humanos com preferência pelos do tipo O tratados com tripsina. A atividade hemaglutinante de CcL se mostrou dependente do íon cálcio e foi fortemente inibida pela glicoproteína mucina bovina (BSM) até a concentração mínima de 0,125 mg/mL. CcL foi estável numa ampla faixa de pH, que variou entre 2,5-11,5 e termoestável até 80C por uma hora. A massa molecular da CcL, determ inada por cromatografia de gel filtração Superose 6 10 300 GL em sistema de FPLC-AKTA foi de aproximadamente 140,3 kDa e uma eletroforese SDS-PAGE revelou uma única banda com massa molecular de aproximadamente 14,5 kDa quando a lectina foi aquecida à temperatura de 100 ⁰C. CcL induziu a ativação de macrófagos murinos in vitro com conseqüente liberação de óxido nítrico atingindo a máxima produção de óxido nítrico no tempo de 24 h. Em modelo experimental de edema de pata em camundongos, a lectina do fungo apresentou atividade pró-inflamatória sendo capaz de induzir a formação do edema. A viabilidade celular das linhagens celulares HepG2, MDA 435 e 3T3 foi analisada após incubação por 72 h com concentrações de CcL (0,5-50 μg/mL). O valor do IC50 foi obtido com a concentração de CcL de 50 μg/mL para linhagem de células HepG2. No presente trabalho, os efeitos imunomodulatórios e antiproliferativos foram observados apontando a CcL como um possível imunomodulador, interferindo na resposta imune de macrófagos levando a possíveis efeitos anti-parasitários, anti-tumorais ou agente diagnóstico e/ou terapêutico

ASSUNTO(S)

bioquimica macrófagos Óxido nítrico hepg2 edema de pata

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