Purificação, caracterização e análise da atividade bioinseticida, de um inibidor de tripsina em sementes de catanduva (Piptadenia moniliformis)

AUTOR(ES)

Ana Celly Bezerra Cruz

DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

Um inibidor de tripsina da família Kunitz (PmTI) foi purificado de sementes de Piptadenia moniliformis, uma árvore da sub-família Mimosoideae, através da precipitação com ácido tricloroacético (TCA), cromatografia de afinidade com tripsina acoplada em sepharose, coluna DEAE- celulose(troca iônica) e Superose 12 (exclusão molecular) em sistema FPLC/AKTA. O inibidor possui massa molecular de 25 kDa como confirmado através de SDS-PAGE e cromatografia de exclusão molecular. A seqüência do N-terminal deste inibidor mostrou alta homologia com outros inibidores da família Kunitz. Este também é estável as variações de temperatura e pH, e apresentou um pequeno decréscimo na sua atividade quando incubado com DTT na concentração de 100 mM por 120 minutos. A inibição da tripsina foi do tipo competitiva com Ki de 1,57x10-11 mM. A atividade da tripsina foi inibida efetivamente com percentual de inibição de 100%, entre as outras enzimas testadas não foi detectada inibição para a bromelaína, foi fracamente inibidor da elastase pancreática (3,17% de inibição), inibiu em 76,42% elastase de neutrófilos, inibiu de forma moderada quimotripsina e papaína com percentual de inibição de 42,96% e 23,10%, respectivamente. Ensaios in vitro foram realizados com as proteinases digestivas de Lepidóptera, Coleóptera e Díptera. Vários graus de inibição foram encontrados. Para Anthonomus grandis e Ceratitis capitata a inibição foi de 89,93% e 70,52%, respectivamente, e as enzimas de Zabrotes subfasciatus e Callosobruchus maculatus foram inibidas com percentuais de 5,96% e 9,41% respectivamente, e as enzimas de Plodia interpunctella e Castnia licus foram inibidas com percentuais de 59,94% e 23,67%, respectivamente. No ensaio in vivo, foi observada redução no desenvolvimento de larvas em 4 ínstar de C. capitata, quando PmTI foi adicionado à dieta artificial, obtendo WD50 de 0,30% e LD50 0,33% . Estes resultados sugerem que este inibidor possa ser um forte candidato para programas de melhoramentos de plantas via transgenia

ASSUNTO(S)

inibidor de tripsina trypsin inhibitor bioinsecticide inibidor kunitz kunitz inhibitor bioquimica insect pests piptadenia moniliformis piptadenia moniliformis insetos praga bioinseticida

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