Otimização dos métodos para avaliar o DNA mitocondrial obtido a partir de tumores mamários caninos incluídos em parafina
AUTOR(ES)
Bertagnolli, Angélica C., Máximo, Valdemar, van Asch, Bárbara, Amorim, António, Cirnes, Luis, Soares, Paula, Cassali, Geovanni D.
FONTE
Jornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial
DATA DE PUBLICAÇÃO
2008-08
RESUMO
A presente comunicação descreve as modificações usadas para extrair e amplificar o DNA mitocondrial obtido de amostras de tumores mamários caninos fixados em formol tamponado a 10% e incluídos em parafina. Os componentes epiteliais e mesenquimais (condromixóide e condróide), bem como a mama normal adjacente, foram microdissectados manualmente de 19 tumores mamários (10 tumores mistos benignos e nove carcinomas em tumores mistos). O DNA foi extraído utilizando-se o Invisorb® Spin Tissue Mini Kit com modificações do protocolo proposto pelo fabricante. Um fragmento de 273-pb foi amplificado por reação em cadeia da polimerase (PCR) e seqüenciado em seqüenciador automático. O fragmento foi analisado em 100% das amostras, entretanto modificações como lise adicional, redução do volume das soluções de extração e PCR, aumento da temperatura de anelamento e do número de ciclos de amplificação foram necessárias. Em seis amostras os produtos iniciais de PCR foram diluídos e reamplificados para obtenção de sucesso.
ASSUNTO(S)
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