Influence of the use of various antioxidants and equilibrium times on sperm parameters during the cooling and post-thawing in sheep. / Influência do uso de diferentes antioxidantes e tempos de equilíbrio sobre parâmetros espermáticos durante a refrigeração e pós-descongelação em ovinos.

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

30/03/2011

RESUMO

Objetivou-se com esse trabalho avaliar o efeito da utilização de diferentes concentrações de substâncias antioxidantes sobre a cinética do sêmen ovino resfriado e pósdescongelação, e a influência da associação entre antioxidantes e diferentes tempos de equilíbrio na qualidade do sêmen ovino descongelado, utilizando para isso dois experimentos. Experimento 1. Objetivou-se avaliar os efeitos da suplementação com glutationa reduzida (GSH) e catalase (CAT) sobre a cinemática e funcionalidade de membrana durante a refrigeração do sêmen ovino a 5 ˚C durante 24 h. Amostras de semen de quarto carneiros foram reunidas em pool, diluídas em Tris-gema sem antioxidante (controle) ou suplementadas com CAT ((100, 200 e 400 U/mL) ou GSH (100, 200 e 400 mM) numa concentração final de 50 x 106 espermatozóides/mL. A cinemática, avaliada com auxílio de computador (CASA) e a funcionalidade da membrana (HOST) foi avaliada após adição das diferentes amostras de semen em diferentes tempos de armazenamento (fresco/diluído; após 1,5; 6; 12; e 24 h). Não foram observadas diferenças significativas na cinemática ou integridade de membrana entre tratamentos nos diferentes períodos de avaliação. A suplementação com 100 e 200 U/mL de CAT reduziu os efeitos prejudiciais da refrigeração sobre a motilidade espermática. A suplementação com 400 mM de GSH resultou em redução precoce (P <0,05) da motilidade total, diminuição na taxa de espermatozóides rápidos e na velocidade curvilinear. A refrigeração conduziu a uma redução (P <0,05) no percentual de espermatozóides com membrana plasmática funcional (HOST), especialmente após 1,5 h de incubação. Baseado nos resultados, concluiu-se que a adição de CAT (100 e 200 U/mL) reduziu os efeitos deletérios da refrigeração na motilidade total do semen ovino mantido a 5 ˚C por 24 h, embora não tenha afetado a funcionalidade da membrana espermática. Todavia, a adição de 400 mM GSH causou efeitos negativos sobre os parâmetros de velocidade espermática. Experimento 2. Objetivou-se avaliar o efeito de vários antioxidantes e duração do tempo de equilíbrio na criopreservação do semen ovino. Amostras de semen de quatro animais foram agrupadas em pool, diluídas em Tris-gema sem antioxidante (controle) ou suplementadas com glutationa reduzida (GSH: 0,5; 1,0 e 2,0 mM), superóxido dismutase (SOD: 5, 10 e 20 U/mL) ou catalase (CAT: 5, 10 e 20 U/mL), e criopreservadas imediatamente após a obtenção do equilíbrio térmico a 5 C (0 h), após 12 e 24 h de tempo de equilíbrio. A capacidade antioxidante total foi determinada no diluidor in natura e após diluição das amostras de semen nos vários tratamentos e diferentes momentos de processamento (fresco/diluído, ao longo da refrigeração e pós-descongelação). A integridade da membrana plasmática (IP-DCF), acrossomal (FITC-PNA) e o potencial de membrana mitocondrial (JC-1) foram determinados nas amostras frescas/diluídas, refrigeradas e pós-descongelação. A motilidade espermática pós-descongelação foi avaliada com auxílio de computador (CASA). Não foram observadas diferenças significativas na integridade acrossomal ou potencial de membrana mitocondrial entre tratamentos após a refrigeração e descongelação, independentemente da adição dos antioxidantes. A integridade da membrana plasmática foi inferior (P <0,05) quando da criopreservação do semen imediatamente após a obtenção do tempo de equilíbrio (20,1 8,3; média DP) quando comparado à utilização de 12 h de tempo de equilíbrio (42,5 10,9); todavia a adição de SOD e CAT (10 e 20 U/mL) resultou em ausência de diferença significante entre a utilização de 0 e 12 h de tempo de equilíbrio. A atividade antioxidante total não diferiu (P >0,05) entre tratamentos após a adição do semen ou ao longo da refrigeração e pós-descongelação. Em conclusão, a adição de GSH, SOD ou CAT não aumentou a capacidade antioxidante total do semen, nem a qualidade espermática pósdescongelação. No entanto, a manutenção do semen ovino a 5 C durante 12 h antes da criopreservação reduziu os danos à membrana espermática pós-descongelação.

ASSUNTO(S)

medicina veterinaria espermatozóides antioxidantes criopreservação spermatozoa, antioxidants, cryopreservation

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