Imunolocalização e quantificação da proteina SP22 em espermatozoides de ovinos e sua relação com outros parametros espermaticos / Immunolocalization and quantification of the SP22 protein on ovine sperm and its relationship to other sperm parameters
AUTOR(ES)
Ana Paula Alves Favareto
DATA DE PUBLICAÇÃO
2008
RESUMO
Vários estudos têm demonstrado que a proteína espermática de membrana SP22 (22-28 kDa) é altamente correlacionada com a fertilidade. A localização desta proteína no segmento equatorial da cabeça espermática em várias espécies mamíferas, e a inibição de fertilização in vivo e in vitro, obtida com a incubação de espermatozóides com anticorpos anti-rSP22, sugerem sua participação na interação espermatozóide-oócito e sua importância para a capacidade reprodutiva masculina. Assim, os objetivos do presente estudo foram avaliar a presença da proteína SP22 em espermatozóides de carneiros adultos (raças Dorper e Santa Inês), identificando sua localização; quantificar os níveis desta proteína mediante as técnicas de ELISA e imunomarcação fluorescente utilizando anticorpo anti-rSP22; e correlacionar os seus níveis com os parâmetros espermáticos de morfologia, integridade de membrana avaliada por sondas fluorescentes (diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídio), e cinética obtida por sistema computadorizado (CASA). A SP22 foi especificamente localizada no segmento equatorial da cabeça e no colo do espermatozóide ovino. As técnicas de ELISA e imunomarcação fluorescente mostraram-se eficientes para a quantificação da SP22 nos espermatozóides ovinos e altamente correlacionadas (R2 = 0,70). Não houve diferença significativa (P >0,05) nos níveis de SP22 obtidos por estes dois métodos entre as raças estudadas. Para o estudo da cinética espermática foi realizada análise estatística multivariada, considerando os valores individuais obtidos pelo sistema CASA (1 ejaculado por carneiro, n = 3847 espermatozóides). Através da análise de agrupamento foi possível estabelecer um número de 3 sub-populações espermáticas coexistentes no ejaculado dos carneiros. A sub-população 1 foi a mais ativa e progressiva. A subpopulação 3 teve movimento pouco progressivo e não-linear, e a sub-população 2 teve um padrão de cinética intermediário. Houve diferença significativa (qui-quadrado = 824,39; grau de liberdade = 34; P <0,0001) na distribuição das 3 sub-populações nos carneiros. No entanto, não houve correlação significativa (P >0,05) entre a proporção de cada sub-população nos carneiros e os níveis de SP22 avaliados por ELISA e imunomarcação fluorescente. A integridade de membrana espermática foi positivamente correlacionada (R2 = 0,48; P = 0,02) com a proporção de espermatozóides da sub população 1 e negativamente correlacionada (R2 = 0,30; P = 0,02) com a sub-população 3. Porém, este parâmetro espermático não foi correlacionado (P >0,05) com a proporção de espermatozóides da sub-população 2. Além disso, a morfologia espermática não foi correlacionada (P >0,05) às proporções das três sub-populações cinéticas encontradas. Os níveis de SP22 obtidos por ELISA foram negativa e positivamente correlacionados (R2 para as 3 variáveis = 0,47) com as porcentagens de espermatozóides morfologicamente anormais e de espermatozóides com membrana plasmática íntegra, respectivamente. A quantificação de SP22 por análise de imunomarcação fluorescente não foi correlacionada com nenhum dos parâmetros espermáticos avaliados. Estes resultados demonstraram que o estudo da proteína SP22 em espermatozóides ovinos pode trazer importantes informações a respeito da capacidade reprodutiva destes animais. Entretanto, para a validação desta proteína como um biomarcador de fertilidade nesta espécie são necessários estudos que correlacionem os níveis da SP22 com as taxas de fertilidade obtidas in vivo e/ou in vitro.
ASSUNTO(S)
espermatozoides carneiro sp22 protein sperm proteina sp22 analise computadorizada do semen (casa) computer-assisted sperm analysis (casa) rams
ACESSO AO ARTIGO
http://libdigi.unicamp.br/document/?code=vtls000436652Documentos Relacionados
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