Influence of ingesting Bifidobacterium breve present in the human milk on intestinal microbiota modulation, colon histomorphometry, and production of cytokines and oxygen and nitrogen reactive species in the murine model / Influência da ingestão de Bifidobacterium breve carreada no leite humano na modulação da microbiota intestinal, na histomorfometria do cólon, na produção de citocinas e de espécies reativas do oxigênio e do nitrogênio em modelo murino

Maria da Penha Píccolo Ramos

O objetivo desse trabalho foi avaliar grupos microbianos presentes no leite materno obtido de doadoras voluntárias durante o período de lactação de 10 a 30 dias e sua importância em bancos de leite humano. Verificar também o pH e o processo de modulação dos diferentes grupos microbianos presentes no conteúdo cecal em modelo murino, por meio da ingestão de leite materno pasteurizado adicionado ou não de Bifidobacterium breve. Analisar histomorfometricamente a região do cólon ascendente por meio da determinação da profundidade das criptas intestinais e verificar a resposta imunológica nos animais por meio da ingestão de leite materno pasteurizado adicionado ou não de Bifidobacterium breve no exsudato peritonial e células esplênicas para quantificação de citocinas, compostos intermediários do nitrogênio e do oxigênio. A experimentação foi dividida em quatro fases: Na primeira fase, procedeu-se ao cadastramento das doadoras no hospital e coleta do leite materno em domicílio; determinação da qualidade higiênico-sanitária por meio da quantificação de coliformes totais, mesófilos aeróbios totais e Staphylococcus aureus e determinação de pH em amostras de leite materno cru e pasteurizado. Na segunda fase foram selecionadas sete estirpes de bactérias bífidas (UFVCC 1083, 1091, 1099, 1103, 1105, 1108 e 1111) para comporem o pool probiótico que foi adicionado ao leite pasteurizado administrado diariamente aos animais. Na terceira fase do experimento empregou-se em cada repetição 48 fêmeas da raça Wistar com 21 a 23 dias de vida, recém-desmamadas que foram divididas em quatro grupos experimentais: Basal; Controle (dieta); LP (leite humano pasteurizado) e LPB (leite humano pasteurizado adicionado de bactérias bífidas). Os quatro animais que compuseram o grupo basal foram sacrificados no primeiro dia da experimentação (T0) e aqueles dos outros grupos foram alimentados diariamente (0,1 mL) via oral com auxílio de micropipeta esterilizada com diferentes dietas, durante 21 dias e posteriormente sacrificados. Determinou o pH e verificou-se a modulação de grupos microbianos presentes na região cecal por meio da determinação de contagens de bactérias bífidas, clostrídeos, Lactobacillus spp, coliformes totais e mesófilos aeróbios totais juntamente com a análise histomorfométrica da região do cólon ascendente desses animais por meio da determinação da profundidade das criptas intestinais; e na quarta fase do experimento foram utilizados 36 animais fêmeas da raça Wistar os quais foram alimentados diariamente (0,1 mL) via oral com auxílio de micropipeta esterilizada com diferentes tratamentos, que foram Controle (dieta); LP (leite humano pasteurizado) e LPB (leite humano pasteurizado adicionado de bactérias bífidas), durante 30 dias. Posteriormente foram sacrificados para determinação da resposta imunológica por meio da determinação das citocinas IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF-α; da citotoxicidade celular, para determinação de compostos intermediários do nitrogênio (NO), e do oxigênio (H2O2), no sobrenadante de células do exsudato peritonial e esplênico. Conclui-se neste trabalho que apesar da eficiência do processo de pasteurização para patógenos verificado neste estudo, torna-se urgente a necessidade de conscientização por parte das doadoras no que se refere aos métodos de obtenção de coleta do leite materno. É preciso adoção de medidas mais rigorosas de monitoramento do controle de qualidade higiênico-sanitário na ordenha do leite humano coletado em domicílio, pois são imprescindíveis para garantir um alimento seguro para os recém-nascidos. Verificou-se nesta experimentação na região do cólon ascendente dos animais um aumento médio do comprimento das criptas com a idade e que esse aumento foi mais pronunciado no grupo de animais que recebeu Leite Pasteurizado (LP) e, também os resultados mostraram que a adição de bactérias bífidas ao leite materno (LPB) não apresentou risco de alteração da histomorfometria do cólon ascendente quanto ao parâmetro avaliado. Esta informação fundamenta que a adição de bactérias bífidas ao leite pasteurizado nos bancos de leite humano não interfere na integridade do epitélio e tem potencial de beneficiar as crianças que precisam fazer uso desta alternativa. Conclui-se também que bactérias bífidas adicionadas ao leite pasteurizado (LPB) exerceram efeito antagonista para coliformes totais na modulação da microbiota do conteúdo cecal, quando comparado com os outros tratamentos (LP e controle). Verificou-se também que as bactérias bífidas não apresentaram toxicidade oral com relação a viabilidade dos macrófagos e não promoveram efeito adverso na saúde dos animais testados. Finalmente, a administração de bactérias bífidas na dieta influenciou o sistema imunológico dos animais por meio da liberação dos mediadores apresentados. O acúmulo de informações sobre os efeitos benéficos dessas bactérias probióticas tem justificado sua adição em diversos produtos, incluindo o leite pasteurizado, sob a forma concentrada congelada nos bancos de leite humano, gerando alternativas na área de saúde pública no Brasil. E as evidências acumuladas sobre os benefícios decorrentes do uso das bactérias bífidas probióticas justificam o aprofundamento dos estudos sobre seu modo de ação, a fim de otimizar sua utilização como profiláticos e imunomoduladores.

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