Indução de mutantes com alta atividade de penicilina amidase intracelular produzida por E. Coli e estudo de algumas caracteristicas desta enzima

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

1978

RESUMO

De 695 microrganismos isolados do solo e de material clínico, foram encontrados quatro produtores da enzima penicilina amidase , sendo o maior produtor destenzima, uma linhagem de E.coli FEA 30. Verificou-se que esta enzima intracelular, e que o ácido fenil acético induz sua produção. Encontrou-se que o melhor meio de cultura, na produção da enzima penicilina amidase, por E.colí FEA 30 foi: l% de peptona, 0,5 % de extrato de levedura e 0,15% de áicido fenil acético, com pH de 7,0 antes de autoclavagem. A melhor temperatura de incubação, na produção da enzima foi de 23ºC. Um meio de cultura na produção da enzima penicilina amidase com possibilidades de ser usado, a nível industrial foi: 2% de farelo de soja desengordurado, 1% de extrato preparado pela autólise de Saccharomyces cerevisiae, da Fleischmanne, 0,15% de ácido fenil acético, com pH de 7,.0 antes da autoclavagem. Depois de colocar uma suspensão de E.coli FEA por 50 minutos em uma solução de N-metil-N’-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG), foram isoladas 800 linhagens, das quais foi obtida uma mutante denotada como E.coli FEA 30 MQI. Esta mutante produz duas vezes mais penicilina amidase do que a linhagem selvagem, à temperatura de incubação de 25°C. Com esta linhagem mutante E.coli FEA 30 MQl, foi feita novamente indução de mutação e dentre 1.000 linhagens isoladas após a exposição de 50 minutos em MNNG, foi encontrada uma linhagem E.coli FEA 30 MQ2, que produz 120% a mais enzima que a selvagem. Tanto E.coli FEA 30 MQl como E.coli 30 de MQ2. quando inoculadas tem meio infimo de: 15g de KH2PO4 10 g de glicose, Z g de sulfato de amonia, 0,2 g de sulfato de magnisio, com pH ajustado a 7 com hidróxido de sódio, não apresentaram divisão celular, cresccendo em forma filamentosa às temperaturas de incubaçio de 25°C a 37ºC. Com a indução de mutação com raios ultravioletas, não foi possível. encontrar mutante hiperprodutiva, ainda que nestas condições foram conseguidas mutantes auxotrofos e outras a β galactosidase-negativas. A enzima penicilina amidase de E. coli apresentou atividade máxima a temperatura de 40ºC, sendo pH ótimo entre 8,0 e 8,5, seu valor da constante de Michaelis Km foi 37 mM e Vm foi l μmol/min/ml. Na produção de 6APA, por penicilina amidase e penicilina G, à temperatura de incubação de 40°C, usando-se uma concentração de 7% de penicilina G, contendo 0,83 unidades de enzima por mililitro, conseguiu-se uma conversão de 90% em 20 horas de incubação, obtendo-se posteriormente uma recuperação de 70% do 6APA produzido.

ASSUNTO(S)

penicilina enzimas antibioticos

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