Identification of differently expressed genes associated with Citrus Blight (Citrus Spp.). / IdentificaÃÃo de genes diferencialmente expressos associados ao declÃnio dos citros (Citrus spp).

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

O Brasil à o maior produtor de citros do mundo, sendo responsÃvel por mais de 20% da produÃÃo mundial. No entanto, a produÃÃo ainda à baixa devido a muitos problemas fitossanitÃrios, a exemplo do DeclÃnio dos Citros. O DeclÃnio dos Citros à uma anomalia cuja causa ainda nÃo foi determinada. As Ãrvores que comeÃam a declinar nÃo se recuperam, chegam a um estÃgio de declÃnio crÃnico, mas raramente morrem. Embora o DeclÃnio dos Citros tenha sido descrito hà mais de 100 anos, sua etiologia ainda à desconhecida. Consequentemente, nÃo existem medidas de controle para minimizar as perdas na produÃÃo, fato esse que piora, considerando que os sintomas sà sÃo detectados apÃs 3 anos, quando as plantas entram em produÃÃo. O uso de variedades resistentes à considerada a medida de controle mais adequada. Contudo, pouco se conhece sobre os genes envolvidos na resposta de defesa das plantas a essa anomalia. Considerando que muitas alteraÃÃes fisiolÃgicas associadas com respostas a estresses em plantas sÃo controladas ao nÃvel transcripcional, neste estudo objetivou-se a identificaÃÃo e caracterizaÃÃo de produtos de expressÃo gÃnica expressos diferencialmente na resposta ao DeclÃnio dos Citros. Para isso, foi utilizada a tÃcnica de biblioteca subtrativa supressiva (Supression Subtractive Hybridization) utilizando de mRNAs isolados de raÃzes de limoeiro âCravoâ (Citrus limonia L. Osbeck) sob laranja âPeraâ (Citrus sinensis L. Osbeck) com e sem o DeclÃnio. A identificaÃÃo da possÃvel funÃÃo dos genes/ESTs isolados foi realizada por comparaÃÃo de seqÃÃncia com outros genes descritos em bancos de dados de genes. Adicionalmente, a presenÃa da anomalia DeclÃnio foi confirmada mediante anÃlise eletroforÃtica do perfil protÃico em gel âSDS-PAGEâ (Sodium Dodecyl Sulfate polyacrylamide Gel Eletrophoresis) das proteÃnas de raÃz de limÃo âCravoâ (Citrus limonia Osbeck). Foram construÃdas duas bibliotecas subtrativas de cDNAs, uma enriquecida com cDNA diferencialmente de Ãrvores com alto grau do DeclÃnio (forward) e outra enriquecida com genes expressos em plantas amostradas como sadias (reverse). Foram obtidos 129 clones de genes diferencialmente expressos, dos quais 38 representam a biblioteca forward e 91, a biblioteca reverse. ApÃs anÃlise, constatou-se que 45% dos clones da biblioteca subtrativa supressiva vindas de mRNA isolados de Ãrvores com alto grau do DeclÃnio estavam associados a proteÃnas de senescÃncia, enquanto somente 20% desses clones foram identificados na biblioteca subtrativa supressiva vindas de mRNA isolados de plantas sadias. Outros genes foram isolados, apresentando funÃÃes similares relacionadas a proteÃnas, como: LEA do tipo dehidrina, citocromo P450 tipo TBP, provÃvel germina, proteÃna do tipo metalotioneÃna, hidrolase, ubiquitina, proteÃna 14-3-3, que tÃm a funÃÃo de responder a uma gama de estÃmulos e/ou fatores ambientais biÃticos ou abiÃticos e principalmente o de estresse hÃdrico, tambÃm aquelas com funÃÃes hipotÃticas e as que nÃo tiveram nenhuma similaridade com proteÃnas depositadas em banco de dados. Pelos resultados obtidos, infere-se que todas as plantas coletadas em Bebedouro, SP, inclusive aquelas coletadas como sadias, estavam com DeclÃnio dos Citros, porÃm, em estÃgios diferentes da anomalia.

ASSUNTO(S)

biologia molecular citros; expressÃo gÃnica; hibridaÃÃo subtrativa citrus; expressed genes; subtractive hybridization

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