Estudo molecular do Trypanosoma cruzi em tecidos do coração e trato gastrointestinal de pacientes chagasicos cronicos / Molecular study of Trypanosoma cruzi in tissues of the heart and gastrointexstinal tract in chronic chagasic patients

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

A doença de Chagas, causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi, pode seguir diferentes caminhos de acordo com as circunstâncias e situações.A interação parasito-hospedeiro é dinâmica e resulta de muitos fatores relacionados com o tripanossoma (cepa, virulência, inoculação), hospedeiro humano (fatores genéticos, idade, sexo) e o meio. As variações na forma clínica e na gravidade da doença ocorrem entre os pacientes e também de acordo com a região geográfica. A variabilidade em relação ao tropismo e patogenicidade da doença de Chagas levanta questão se as formas clínicas da doença refletem da diferenciação entre as cepas. No entanto, os vários trabalhos não têm conseguido relacionar a forma clínica da doença de Chagas com o perfil genético das cepas predominantes na região estudada.Alguns autores sugerem que a autoimunidade é um importante fator na patogenicidade em tecidos pelo T. cruzi. O objetivo do presente trabalho foi identificar, pela PCR (reação em cadeia da polimerase), e quantificar pela PCR em tempo real, o DNA do T. cruzi diretamente em tecidos conseguidos em autópsias de pacientes chagásicos crônicos, e, a partir da amplificação do kDNA, realizar o seqüenciamento genético em cada amostra. Tais técnicas foram desenvolvidas diretamente nos tecidos afetados, não necessitando de cultura in vitro ou passagens das cepas por outros hospedeiros vertebrados, que poderiam selecionar os clones a serem estudados. Primeiramente, detectamos o parasito através da PCR dupla para a região repetitiva do DNA nuclear do T. cruzi, onde foram analisadas necrópsias de 23 pacientes, sendo 18 com forma cardíaca da doença de Chagas e 5 com a forma cardiodigestiva. As necrópsias desses 23 pacientes somaram um total de 126 blocos, sendo 70 referentes a tecidos do coração e 56 referentes ao TGI. O índice de positividade de amplificação quanto a PCR dupla do DNA satélite foi de 86% nas amostras extraídas do coração e de 87% nas amostras de DNA extraídas do TGI. Dentre os 18 pacientes que apresentavam a forma cardíaca e os 5 pacientes com a forma cardiodigestiva da doença de Chagas, houve positividade em 84,3% e 92% respectivamente. Os 18 casos com forma cardíaca (98 blocos) demonstraram positividade tanto no coração (48/56), quanto no TGI (35/42). Nos 5 casos com forma indeterminada (28 blocos), houve amplificação em todas as amostras do TGI (14/14) e em 85,7% das amostras extraídas do coração (12/14). A partir do produto da PCR que amplifica a região do kDNA, as amostras foram seqüenciadas e alinhadas entre si e com dados obtidos no Gen Bank. Observamos grande variabilidade genética entre as amostras, não sendo possível correlacionar a forma clínica com as variáveis encontradas, sugerindo que o kDNA não é um alvo confiável para genotipagem do T. cruzi. A quantificação pela PCR em tempo real foi realizada em 13 amostras de DNA obtidas do coração e em 8 obtidas do TGI. Houve comparação entre o número de cópias encontradas no coração e TGI em oito casos. Relacionando-se o peso do coração com o número de cópias obtidos nesse órgão, verificamos que corações maiores podem apresentar poucas cópias, havendo uma tendência de correlação inversa entre peso do coração e número de cópias. Comparações realizadas nos oito casos onde houve quantificação de amostras do coração e TGI concomitantemente demonstraram que o coração é o órgão onde aparece maior número de cópias, principalmente nos casos de forma cardíaca. A quantificação pela PCR em tempo real, onde a região alvo foi o DNA satélite, nos ofereceu parâmetros quanto a infectividade relacionada ao número de cópias do T. cruzi no órgão afetado, demonstrando que o parasito tem importante papel na patogênese da doença de Chagas.

ASSUNTO(S)

reação em cadeia de polimerase doença de tripanossoma cruzi pcr (biochemistry) genotyping trypanosoma cruzi genotipagem chagas chagas disease

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