Diatraea saccharalis larvae midgut β-glicosidases: cDNAs cloning and sequencing, expression and some properties / β-glicosidases intestinais da larva de Diatraea saccharalis: clonagem e sequenciamento dos cDNAs, expressão e algumas propriedades

AUTOR(ES)

Alexandra Frealdo Dumont

DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

Utilizando uma bibioteca de expressão feita a partir do epitélio do intestino médio da larva de Diatraea saccharalis, nós clonamos e sequenciamos 3 cDNAs completos (DsβglyA, DsβglyB e DsβglyC), além de uma seqüência parcial que teoricamente codificam β-glicosidases. As sequências dos peptídeos obtidos após digestão por tripsina das β-glicosidases βgly1 e βgly2 de D. saccharalis mostraram que DsβglyA codifica a βgly1, caracterizada anteriormente. DsβglyB e DsβglyC provavelmente codificam duas β-glicosidases solúveis com massas moleculares teóricas de, respectivamente, 57,5 KDa e 56,2 KDa. Levando em consideração as semelhanças entre βgly1 e βgly3 e entre DsβglyA e DsβglyC, é razoável supor que DsβglyC codifique a βgly3. Os peptídeos produzidos após a hidrólise de βgly2 por tripsina não são codificados por nenhum dos cDNAs que nós sequenciamos. βgly2 provavelmente é codificada pelo cDNA cuja seqüência ainda está incompleta. A inativação da βgly2 por carbodiimida usando o tio-glicosídeo sinigrina e o O-glicosídeo p-nitrofenil β-D-galactopiranosídeo resulta na mesma constante de inativação, indicando que o mesmo sítio ativo é responsável pela hidrólise dos dois substratos. A mesma conclusão é obtida calculando o Km de βgly2 para os dois substratos e o Ki da inibição que cada um deles causa na hidrólise do outro. Os resultados indicam que uma só enzima é responsável pela hidrólise de sinigrina e p-nitrofenil β-D-glicosídeo com atividade semelhante. Essa propriedade nunca foi descrita para outra tio- ou O-glicosidase.

ASSUNTO(S)

enzimology beta-glicosidase digestão animal enzimas digestivas insects insetos enzimologia midgut enzymes biologia molecular molecular biology lepidoptera β-glycosidase lepidoptera

Documentos Relacionados

• Cloning and sequencing of cDNAs encoding the two subunits of Crotoxin.
• Molecular cloning and sequencing of cDNAs encoding the entire rat fatty acid synthase.
• Cloning and sequencing of cDNAs encoding alpha and beta subunits of human pyruvate dehydrogenase.
• Purificação, caracterização, clonagem e seqüenciamento de β-glicosidades de Tenebrio molitor (Coleoptera)
• Cloning and Sequencing of cDNAs for Hypothetical Genes from Chromosome 2 of Arabidopsis1[w]