DESENVOLVIMENTO DE SONDA MOLECULAR PARA DETECÇÃO DO VÍRUS DA HEPATITE A EM AMOSTRAS AMBIENTAIS DE ÁGUA

AUTOR(ES)

Matheus Ismerim Silva Santos

DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

Infecção pelo vírus da hepatite A (HAV) acontece mundialmente e é a causa mais comum de hepatites virais agudas. A prevalência mais alta desta infecção é observada onde baixos padrões de serviço de saúde pública são adotados. Adquirida principalmente pela rota fecal-oral, a infecção por HAV é disseminada facilmente, através de contato de pessoa-para-pessoa ou por ingestão de comida ou água contaminada. O HAV é uma partícula não envelopada, extremamente estável que possui RNA fita simples de sentido positivo com aproximadamente 7,5 kb. O objetivo deste estudo foi desenvolver, baseado na seqüência do gene VP1, uma sonda de DNA a partir do genoma de HAV por RT-PCR para detectar o vírus. Um amplicon de 783 bp do genoma de HAV (amostra padrão HAF-203), amplificado por RT-PCR foi marcado pela enzima fosfatase alcalina do sistema Gene ImagesTM AlkPhos DirectTM (Amersham). A especificidade foi determinada por hibridização em dot blot com RNA da amostra padrão brasileira HAF-203 e DNA do próprio amplicon. Para testar a sensibilidade de detecção por hibridização foi realizada diluição seriada até 1 pg de RNA viral purificado. Foram contaminadas artificialmente amostras de água de esgoto com diluições até 10 PFU/mL do vírus. As partículas foram precipitadas com sulfato de amônia e RNA total obtido através de tratamento com proteinase k e fenol:clorofórmio. Amostras foram transferidas para uma membrana de nylon por dot blot e hibridizadas de acordo com as instruções do fabricante do sistema. A sonda detectou amostras nos poços contendo até 1 pg de RNA purificado, da mesma forma que o amplicon. A sonda de DNA não hibridizou com DNA preparado de BoHV-1, XL2B DNA e RNA total Humano. A sonda hibridizou com amostras que contêm até 100 PFU/mL do vírus. Estes resultados mostram que a os níveis de especificidade e sensibilidade da sonda é suficiente para detectar o vírus em amostras ambientais, tornando esta técnica aplicável no monitorando molecular ambiental do vírus.

ASSUNTO(S)

vírus da hepatite a medicina environmental monitoring monitoramento ambiental molecular probe sonda molecular hepatitis a virus

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