Desenvolvimento de métodos microbiológicos para doseamento de gramicidina matéria-prima
AUTOR(ES)
Ana Gabriela Reis Solano
DATA DE PUBLICAÇÃO
2008
RESUMO
A gramicidina é um pentadecapeptídeo linear antimicrobiano produzido pelo Bacilus brevis e ativo contra bactérias Gram positivo. O método microbiológico turbidimétrico é preconizado para o doseamento de gramicidina (USP 31 e BP 2007). Contudo, não se conseguiu reproduzir a metodologia farmacopéica em laboratório. Além disso, o método por difusão em ágar, uma outra alternativa para o doseamento, não é descrito para este antibiótico. Em vista do exposto, os objetivos deste trabalho foram desenvolver e validar os métodos microbiológicos, por difusão em ágar e turbidimétrico, para o doseamento da gramicidina. O método em placas foi desenvolvido empregando o ágar nutriente e Kocuria rhizophila ATCC 9341 como microrganismo teste. Foram utilizados dois delineamentos: retas paralelas 3x3 e 5x1. A validação do método demonstrou ser linear a relação entre o diâmetro dos halos de inibição e o logaritmo da concentração numa faixa de 5 a 25,3 g/ml. Os resultados obtidos por ambos os delineamentos foram precisos (desvio padrão relativo, DPR, para precisão intra-dia: 0,81 3x3; 1,90 5x1; DPR inter-dias: 1,35 3x3; 2,64 5x1), exatos (intervalo de tolerância a 95% dentro dos limites permitidos) e com veracidade adequada (erros sistemáticos não significativos). Além disso, o método foi seletivo com limites de detecção e quantificação inferior e superior iguais a 2,00; 5,00 e 25,3 g/ml, respectivamente. Não foi observada diferença entre a precisão dos delineamentos empregados no método de difusão em ágar (p>0,05). O método turbidimétrico utilizando caldo GCLT (formulação desenvolvida no laboratório) e Enterococcus hirae ATCC 10541 foi validado. Também foram empregados os delineamentos 3x3 e 5x1. A curva analítica demonstrou ser linear a relação entre a porcentagem de inibição do crescimento microbiano e a concentração de gramicidina no intervalo de 0,08 a 0,88 g/ml. Os resultados obtidos por ambos os delineamentos também foram precisos (DPR intra-dia: 0,18 3x3; 2,32 5x1; DPR inter-dias: 0,69 3x3; 2,47 5x1), exatos e com veracidade adequada. Os limites de detecção, de quantificação inferior e superior foram iguais a 0,06; 0,08 e 0,88 g/ml, respectivamente. Quando o delineamento 3x3 foi utilizado para o método turbidimétrico, resultados mais precisos foram obtidos. Foi verificada a inexistência de diferença significativa entre as precisões dos dois métodos quando o delineamento 3x3 foi empregado e nem quando o 5x1 foi utilizado.
ASSUNTO(S)
farmácia teses. antibióticos teses. medicamentos microbiologia. medicamentos avaliação teses.
