Desenvolvimento de meio de cultura para celulas de inseto e avaliação do potencial de replicação de baculovirus

AUTOR(ES)

Fabiana Regina Xavier Batista

DATA DE PUBLICAÇÃO

2003

RESUMO

Na última década, células de inseto como a Spodoptera frugiperda Sf9 têm sido intensamente empregadas para a produção de proteínas recombinantes e de biopesticidas. Os sistemas de expressão baseados em baculovírus tornaram-se muito populares para a obtenção de componentes de vacinas, sendo uma de suas vantagens sobre outros sistemas a expressão em níveis elevados. Quando utilizados como pesticidas no controle da lagarta da soja Anticarsia gemmatalis, os baculovírus do tipo AgMNPV são considerados eficientes e seguros, pois não infectam vertebrados. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de substituir, em meios de cultura para células de inseto do tipo Spodoptera frugiperda Sf9, total ou parcialmente, o soro fetal bovino (SFB) por concentrado protéico de soro de leite bovino (CPSL) e permeado liofilizado do soro de leite (PL) associados a extrato de levedura, visando a aplicação na produção de baculovírus AgMNPV. A suplementação do meio Grace com estes componentes e com glicose e Pluronic F68 (PF68) foram avaliados através do planejamento experimental, com o intuito de aumentar a concentração e a viabilidade celular na fase média exponencial. A glicose foi empregada como fonte de carbono e energia, o Pluronic F68 foi utilizado como agente protetor contra tensões de cisalhamento, enquanto que o extrato de levedura e os derivados de leite ultrafiltrados como fonte de aminoácidos e fatores de crescimento. O emprego de extrato de levedura, CPSL e do PL resultaram em um aumento expressivo na concentração e na viabilidade celular. Após seis subcultivos para a adaptação celular nas formulações propostas, obtiveram-se em meio Grace contendo 2,7g/L de glicose, 8g/L de extrato de levedura, 1% (v/v) de SFB e 5% (m/v) de CPSL, 37,5x105 células viáveis/mL, ou 2,7g/L de glicose, 8g/L de extrato de levedura, 3% (v/v) de SFB e 1% (m/v) de PL, 46,7x105 células viáveis/mL. A infecção para a produção de baculovírus resultou em 1,6 x107 poliedros/mL, valor este cerca de 2,6 vezes maior que o obtido com o meio Grace tradicionalmente empregado suplementado com 10% de soro fetal bovino e apenas 0,9 vezes menor que o observado no oneroso meio de composição química definida Sf900II, meio livre de soro bovino.

ASSUNTO(S)

celulas leite

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