Cinética de crescimento e produção de lacases do fungo Pleurotus sajor-caju PS-2001 (Fr.) Singer em processo submerso em biorreator com agitação mecânica

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

27/08/2010

RESUMO

Neste trabalho, estudou-se a cinética de crescimento e de produção de lacases de Pleurotus sajor-caju PS-2001 em processo submerso em biorreator com agitação mecânica sob diferentes formulações de meio de cultivo e parâmetros operacionais em regime descontínuo. Elevadas atividades de lacases foram obtidas em meios contendo glicose ou sacarose (5 g.L-1) como fontes de carbono, utilizando-se os indutores enzimáticos ácido benzoico e ácido gálico, com valores próximos a 50 e 78 U.mL-1, respectivamente; embora as atividades enzimáticas tenham sido superiores no meio contendo sacarose, a produtividade volumétrica foi mais elevada com glicose (0,654 e 0,871 U.mL-1.h-1, respectivamente). Os melhores resultados sob diferentes concentrações de oxigênio dissolvido (OD) foram obtidos com o parâmetro controlado em, no mínimo, 30% da saturação. Sob diferentes condições de pH, os melhores títulos enzimáticos foram alcançados em pH fixo de 6,5 para meios contendo glicose e em pH não controlado para meios contendo sacarose. A temperatura que mais favoreceu a síntese enzimática foi 28oC. Nas condições testadas, caseína pura mostrou ser uma fonte de nitrogênio orgânico essencial ao cultivo fúngico, visto que, na sua ausência, o crescimento e a atividade enzimática foram muito baixos. A presença de aminoácidos aromáticos (fenilalanina, tirosina e triptofano) proporcionou atividades enzimáticas semelhantes às obtidas em meio padrão (composto por glicose, caseína pura, ácido benzoico, CuSO4 e solução mineral). A adição de 20 g.L-1 de glicose não foi favorável à produção de lacases, que mostrou ser associada ao crescimento fúngico, uma vez que os perfis cinéticos de aumento dos títulos enzimáticos e de biomassa coincidem com as variações com o tempo da concentração de substrato, pH e OD, durante um período de intenso metabolismo. Após precipitação do caldo enzimático bruto com (NH4)2SO4, para corridas de SDS-PAGE, com posterior renaturação e impregnação do gel com o substrato ABTS, verificou-se a presença de três bandas de atividade de lacases, com massas moleculares próximas a 70, 45 e 35 kDa. Valores de pH ótimo de atividade de 2,4, 3,2 e 4,4 foram observados a 25oC. A temperatura ótima foi determinada com os tampões acetato de sódio (pH 5,0), citrato de sódio (pH 5,0) e McIlvaine (pH 3,2), sendo os melhores resultados obtidos a 50oC, para todas as condições testadas. Nos testes de termoestabilidade, com relação à atividade inicial, valores de atividade residual superiores a 60% foram observados a 20 e 30oC, após 168 horas de experimento. A 40oC, a atividade apresentou quedas consideráveis a partir de 36 horas e, a 50 e 60oC, quedas bruscas ocorreram já nas primeiras horas. Valores de Km de 0,6078, 0,5525 e 0,9826 mM e Vmax de 0,0188, 0,0326 e 0,0461 mM.min-1 foram determinados com os tampões acetato de sódio, citrato de sódio e McIlvaine, respectivamente.

ASSUNTO(S)

fungos fungi laccase basidiomycetes lacase basidiomicetos microbiologia

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