AvaliaÃÃo de mÃtodos baseados na reaÃÃo em cadeia da polimerase (PCR), para o diagnÃstico de pacientes em tratamento da malÃria

AUTOR(ES)

Rosana de Albuquerque Montenegro

DATA DE PUBLICAÇÃO

2002

RESUMO

No presente estudo, abordagens moleculares foram utilizadas para o diagnÃstico gÃnero-especÃfico da malÃria em pacientes submetidos a tratamento, nos municÃpios de Monte Negro e Campo Novo no Estado de RondÃnia. Avaliamos o limite de detecÃÃo de DNA atravÃs das tÃcnicas de PCR simples, âhemi nestedâ PCR (HNPCR) e âhemi nestedâ PCR em um Ãnico tubo (STHNPCR) em ensaios realizados com diluiÃÃo seriada de sangue de pacientes infectados com Plasmodium falciparum. Comparamos a sensibilidade dos testes utilizando duas metodologias de extraÃÃo na preparaÃÃo das amostras sanguÃneas para serem processadas atravÃs da PCR: o Chelex e a Saponina. Com o Chelex, a PCR simples mostrou um limite de detecÃÃo de 700 parasitos/μl, enquanto que com a Saponina o limite de detecÃÃo foi de 70 parasitos/μl. A HNPCR e a STHNPCR apresentaram limites semelhantes de detecÃÃo sendo de 7 parasitos/μl atravÃs da extraÃÃo do Chelex e de 0,007 parasitos/μl pela Saponina. Para os experimentos subsequentes, foi selecionada a extraÃÃo pela Saponina, em vista da obtenÃÃo de melhores resultados. As amostras sanguÃneas de 30 pacientes em tratamento para malÃria foram estudadas atravÃs da microscopia Ãtica, PCR simples e HNPCR. De cada paciente foram coletadas duas amostras em ocasiÃes diferentes. A 1Â coleta foi realizada no 4Â e 8Â dia de tratamento antimalÃrico, enquanto que a 2Â amostra foi coletada 48 horas apÃs. Todos os pacientes deram resultados negativos tanto para microscopia Ãtica quanto para PCR simples. O percentual de positividade da HNPCR manteve-se em torno de 50% nas duas coletas pÃs-tratamento, sendo capaz de detectar o DNA do parasito mesmo em pacientes que se tornaram assintomÃticos. NÃo foi demonstrado associaÃÃo significativa entre a presenÃa de manifestaÃÃes clÃnicas e a positividade pela HNPCR. Os resultados desta pesquisa sugerem que abordagens sensÃveis como a nested PCR poderÃo ser Ãteis no monitoramento da parasitemia e resposta clÃnica de indivÃduos em tratamento especÃfico, nas situaÃÃes de oligoparasitemia e na intercepÃÃo da cadeia de transmissÃo epidemiolÃgica da doenÃa

ASSUNTO(S)

polimerase diagnÃstico biofisica malÃria

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