Alkaline gel electrophoresis assay to detect DNA strand breaks and repair mechanisms in Escherichia coli

AUTOR(ES)

Mattos, José Carlos Pelielo de, Motta, Ellen Serri da, Oliveira, Márcia Betania Nunes de, Dantas, Flávio José da Silva, Araujo, Adriano Caldeira de

FONTE

Brazilian Archives of Biology and Technology

DATA DE PUBLICAÇÃO

2008-12

RESUMO

Espécies reativas de oxigênio (ERO) podem induzir lesões em diferentes alvos celulares, incluindo o DNA. O cloreto estanoso (SnCl2) é um gerador de ERO que induz letalidade em E. coli, sendo o reparo por excisão de bases (BER) um mecanismo importante neste processo. Técnicas como o ensaio cometa (em eucariotos) e a eletroforese de DNA plasmidial em gel de agarose têm sido utilizadas para detectar genotoxicidade. No presente estudo, uma adaptação do método de eletroforese em gel alcalino de agarose foi usada para verificar a indução de quebras, pelo SnCl2, no DNA de E. coli, bem como a participação de enzimas do BER na restauração das lesões. Os resultados mostraram que o SnCl2 induziu quebras no DNA de todas as cepas testadas. Além disso, endonuclease IV e exonuclease III estão envolvidas na reparação dos danos. Em resumo, os dados obtidos indicam que a metodologia de eletroforese em gel alcalino de agarose pode ser empregada tanto para o estudo de quebras no DNA, quanto para avaliação dos mecanismos de reparação associados.

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