Expressão, purificação e caracterização do Leishmania RNA Virus 1-4 e da proteína U5-15k do Tripanosoma brucei / Expression, purification and caracterization of Leishmania RNA Virus 1-4 and U5-15k protein of Tripanosoma bruceiem

AUTOR(ES)

Marcos Michel de Souza

FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

17/09/2012

RESUMO

O estudo dos protozoários é importante por diversos motivos, entre eles sua diversidade, sua importância evolucionária e impacto na saúde pública. Muitos aspectos tornam o estudo desses seres vivo ainda mais fascinantes, como por exemplo, fenômenos como o trans-splincing e a presença de um vírus em algumas espécies de leishmanias. A proteína U5-15k é considerada de grande importância fazendo parte do spliciossoma. Neste trabalho tivemos o objetivo de iniciar a caracterização desta proteína empregando ferramentas de bioinformática para analisar sua sequencia de aminoácidos, sua estrutura secundária e modelar sua estrutura por homologia, também foi possível otimizar sua expressão, purificação, caracterizar sua auto clivagem e fazer estudos biofísicos de Espalhamento Dinâmico de Luz e Espectroscopia de Dicroísmo Circular. O Leishmania RNA vírus 1-4 (LRV1-4) é um vírus da família Totiviridae de capsídeo icosaédrico que codifica duas proteínas (proteína capsidial e RNA polimerase). Sendo pouco estudado tivemos o objetivo de iniciar a caracterização molecular deste vírus com objetivos futuros de empreender estudos estruturais e funcionais. Não foi possível obter expressão recombinante em nenhuma das duas proteínas virais, por isso se optou por se estabelecer um novo protocolo de lise celular e purificação com o qual se obteve imagens inéditas de Microscopia Eletrônica de Varredura, na qual o vírus é purificado ainda envolto em material genético.

ASSUNTO(S)

leishmania rna virus 1-4 leishmania rna vírus 1-4 expressão de proteínas protein expression u5-15k tripanosoma brucei u5-15k tripanosoma brucei

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