Vicilinas de sementes de leguminosas selvagens:purificação, caracterização, efeito de deletério e mecanismo de ação para bruquídeos e para fungos fitopatogêncios

AUTOR(ES)

Fabiano de Moura Teixeira

DATA DE PUBLICAÇÃO

2006

RESUMO

Sementes de leguminosas das espécies Crotalaria pallida, Erythrina veluntina e Enterolobium contortisiliquum tiveram suas frações globulínicas isoladas. As globulinas não apresentaram atividade de inibidores para as enzimas tipo serínicas, cisteínicas, aspárticas e para as amilases de homogenatos intestinais de larvas de Callosobruchus maculatus e Zabrotes subfasciatus. Os testes de atividades hemaglutinantes indicaram que apenas a globulina de Erytrina veluntina apresentou contaminação com lectinas com afinidade para eritrócitos humanos do tipo A, B e O. As vicilinas foram então purificadas usando-se duas cromatografias de filtração em gel, Sephacryl S-300 seguido de uma Sephacryl S-200 calibrada com marcadores de massa molecular conhecidos. Vicilinas de C. pallida (CpV) e E. veluntina (EvV) apresentaram massa molecular de 124,6 kDa e a de E. contortisiliquum (EcV) com massa molecular de 151 kDa..Eletroforese desnaturante mostrou que CpV possui 4 subunidades de massas moleculares aparentes de 66, 63, 57, 45 kDa; a de EvV com duas subunidades de massa molecular aparente de 66,2 e 63,8 kDa e EcV três subunidades de massa molecular aparente de 54,9 kDa. Essas proteínas mostraram ser homogêneas por eletroforese nativa com bandas únicas, onde CpV revelou ser a proteína menos ácida. Todas as vicilinas são glicoproteínas,com conteúdo de carboidrato variando de 1 a 1,5%. Bioensaios foram feitos para determinar o efeito deletério das vicilinas para C. maculatus e Z. subfasciatus. Cpv, EvV e EcV apresentaram WD50 de 0,28, 0,19 e 1,03%; LD50 de 0,2, 0,26 e 1,11% para C. maculatus, respectivamente . As curvas dose resposta para Cpv, EvV e EcV para Z. subfasciatus apresentou WD50 de 0,12, 0,14 e 0,65%; e LD50 de 0,09, 0,10 e 0,43%, respectivamente. Ensaios digestórios utilizando se enzimas dos intestinos médio de bruquídeos mostraram que as vicilinas são resistentes à proteólise, dentre elas destaca-se EcV, que mesmo depois de incubadas por 24 horas não foram hidrolisados pelas enzimas de de C. maculatus. Nos ensaios para fungos fitopatógenos apenas EcV foi capaz de inibir a germinação de esporos de Fusarium solani à concentração de 10 e 20 g. O mecanismo de ação proposto para as vicilinas foi baseado na propriedade que essas proteínas tiveram de se ligarem a quitina ou estruturas quitinosas presentes nos intestinos médios das larvas associado à baixa digestibilidade destas proteínas para enzimas dos insetos

ASSUNTO(S)

maculatus subfasciatus vacilin bioquimica sementes subfasciatus vicilinas maculatus seeds

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