Uso da eletroforese de enzimas constitutivas na caracterização interespecifica de leveduras orais
AUTOR(ES)
Edvaldo Antonio Ribeiro Rosa
DATA DE PUBLICAÇÃO
2000
RESUMO
Na presente tese, buscou-se estabelecer os graus de diversidade existentes entre diferentes espécies de leveduras do gênero Candida isoladas da cavidade oral de indivíduos saudáveis por meio do emprego da técnica de eletroforese de enzimas constitutivas. Para tanto, linhagens representativas de diferentes espécies de Candida (C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei, e C. guilliermondii) e também suas respectivas linhagens-tipo foram crescidas em frascos com meio de cultura líquido, os quais após incubação (37ºC, 150rprn, 18 horas) foram centrifugados e seus pel/ets lavados. As massas celulares obtidas foram processadas num disrruptor celular tipo Mini Bead-beater que permitiu a obtenção dos extratos citossólicos brutos, os quais foram aplicados em tiras de papel de filtro e suas proteínas separadas por eletroforese em gel de amido. A atividade enzimática foi acessada para 20 sistemas: álcool desidrogenase (ADH), lactato desidrogenase (LDH), malato desidrogenase (Iill)H), isocitrato desidrogenase (IDH), glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PDH), aspartato desidrogenase (ASD), glucose desidrogenase (GDH), manitol desidrogenase (MADH), sorbitol desidrogenase (SDH), aconitase (ACO), enzima málica (ME), catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD), transaminase glutâmico-oxalacética (GOT), a-esterase (EST), B-esterase (EST), leucina aminopeptidase (LAP), glicosil transferase (GTF), peroxidase (PO) e a-amilase (a-AM).A partir dos géis revelados foram feitos os diagramas representativos da mobilidade eletroforética das bandas que permitiram a confecção de fenogramas de similaridade para cada sistema enzimático. Os sistemas que forneceram bandas perceptíveis permitiram a análise da diversidade das espécies analisadas tanto em termos fenéticos quanto genéticos, que possibilitaram a redação de quatro artigos originais. Nesses originais pode-se observar a diversidade acessada através da análise conjunta de todas enzimas, da análise conjunta de todas as desidrogenases, e da análise genética dos diferentes loci, bem como uma comparação da capacidade discriminatória estabelecida entre a técnica de eletroforese de enzimas constitutivas (MLEE) e a técnica de eletroforese de proteínas totais em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE)
ASSUNTO(S)
candida analise numerica isoenzimas
ACESSO AO ARTIGO
http://libdigi.unicamp.br/document/?code=vtls000215026Documentos Relacionados
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