Transformação genética do fungo entomopatogênico Beauveria bassiana via Agrobacterium tumefaciens

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2004

RESUMO

A metodologia de transformação genética mediada pela bactéria Agrobacterium tumefaciens (agro-transformação) foi aplicada com sucesso para o fungo entomopatogênico Beauveria bassiana. Conídios de B. bassiana foram transformados utilizando-se o gene hph de Escherichia coli que confere resistência ao antibiótico higromicina B como marcador seletivo, sob controle de promotores heterólogos e a seqüência de término trpC de Aspergillus nidulans. A eficiência de transformação foi de até 28 e 96 transformantes por 104 e 105 conídios alvos, respectivamente, utilizando três vetores binários distintos. Alta estabilidade mitótica dos transformantes (80-100%) foi observada após 5 passagens sucessivas em meio não seletivo. A ocorrência de transformantes abortivos foi observada para todos os vetores binários utilizados. Os transformantes foram analisados quanto a presença do gene hph por PCR e Southern blot. A análise de Southern revelou a ocorrência de integração de mais de uma cópia do gene hph no genoma dos transformantes. O método de agro-transformação foi efetivo na obtenção de transformantes de B. bassiana resistentes à higromicina, possibilitando seu emprego em estudos de mutagênese insersional neste fungo.

ASSUNTO(S)

agrobacterium aspergillus fungos entomopatogênicos microbiologia agrobacterium aspergillus microbiology

Documentos Relacionados