Transformação genética de Candida spp via Agrobacterium tumefaciens

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

Este trabalho descreve o estabelecimento de um sistema de transformação eficiente para as espécies de leveduras oportunistas Candida albicans, C. tropicalis e C. glabrata, importantes patógenos humanos, pelo emprego da metodologia de transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens. As células fúngicas foram transformadas em diferentes condições de co-cultivo utilizando o vetor binário pBTS-4, que contém o gene de resistência ao antibiótico Higromicina B (hph) como marcador de seleção. Nossos resultados indicam uma freqüência de transformação para C. albicans, C. tropicalis e C. glabrata de até 1471, 1612 e 83 transformantes obtidos por co-cultivo, respectivamente. Após quatro repiques em meio não seletivo, todos os transformantes analisados cresceram quando expostos novamente ao meio de seleção, sendo desta forma 100% estáveis mitóticamente. A PCR e o dot-blot confirmaram molecularmente a transformação das espécies de Candida, gerando o produto de amplificação esperado de 600pb, e hibridado positivamente com os transformantes quando o mesmo foi utilizado como sonda. A habilidade da linhagem AGL-1 em aderir às células fúngicas nas condições de co-cultivo foi observada através do emprego de microscopia eletrônica de varredura e transmissão. A reprodutibilidade do sistema de transformação descrito neste trabalho pode fornecer um método para a manipulação genética destes patógenos que irá facilitar a análise molecular detalhada destas espécies fúngicas.

ASSUNTO(S)

transformação bacteriana agrobacterium candida microbial genetics bacterial transformation agrobacterium candida genética microbiana

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