Sequência completa e caracterização do plasmídeo crípico pVCM1 isolado de Salmonella enterica / Complete sequence and carachterization of cryptic plasmid isoladed from Salmonella enterica

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

26/03/2009

RESUMO

Salmonellas ssp são bactérias Gram negativas pertencente a família das enterobácterias. A S. entérica compreende cerca de 2.500 sorovares. Esses sorovares podem infectar vários hospedeiros incluindo aves, bovinos, suínos e humanos, e são os agentes causais das salmoneloses, um importante problema de saúde pública em todo mundo. Múltiplas cópias de pequenos plasmídeos são frequentemente isolados de bactérias Gram negativas e Gram positivas. Nas salmonelas, plasmídeos com baixa massa molecular são encontradas em 10% das linhagens e suas funções biológicas são desconhecidas. Entretanto, muitos plasmídeos de salmonela controlam propriedades importantes, tais como, fatores de virulência, resistência a antibióticos e metais pesados, e utilização de fontes alternativas de carbono. O plasmídeo pVCM1 foi extraído de uma linhagem S. Enteritidis, isoladas de carcaças de frango. Essa linhagem foi crescida em meio Lúria-Bertani líquido e sólido à 37C. O plasmídeo foi purificado, separado em gel de agarose 1% e visualizado com coloração por brometo de etídio. O plasmídeo foi digerido com EcoRI e subclonado no vetor pUC18. A estabilidade plasmidial foi avaliada inoculando células de E. coli transformadas com plasmídeo pVCM1 (clonado em pUC18) em meio Lúria- bertani líquido suplementado com ampicilina. O pVCM1 foi estável por mais de 240 gerações A sequência nucleotídica total do plasmídeo possui 1981 pb. Pequisa por sequências no GenBank, mostrou que o pVCM1 apresenta similaridade de 99% com o plasmídeo pB e 92% com plasmídeo pJ, os quais foram isolados de S. Enteritidis.Das 11 possíveis ORFS apenas uma única ORF apresentou similaridade significativa com outras proteínas do GenBank. A proteína codificada por essa ORF apresentou homologia com as proteínas Rep de plasmídeos que replicam via círculo rolante. O pVCM1 apresenta três regiões importantes: gene rep, origem de fita simples (SSO) e regiões repetidas invertidas. Tais regiões são importantes para o mecanismo de replicação via círculo rolante, sugerindo que o pVCM1 utilize esse mecanismo. O gene rep foi amplificado e clonado no vetor pGEM T-easy, mas a expressão heteróloga da proteína Rep não foi obtida com sucesso.

ASSUNTO(S)

biologia geral 1. plasmídeo; 2. salmonella entérica 3. replicação via círculo-rolante 3. salmonella 1. plasmídeo 2. replicação via círculo-rolante 3. salmonella 2. rolling-circle replication 1. plasmid

ACESSO AO ARTIGO

Documentos Relacionados