Seleção in vivo de peptídeos ligantes à articulações inflamadas e seu potencial uso em diagnóstico

Tamiris Aparecida da Silva

CAPÍTULO I: O sistema imunológico é constituído de uma complexa rede de moléculas e células que funciona a fim de proteger o organismo contra patógenos. O sistema imune sadio deve manter o balanço entre a capacidade de responder a agentes infecciosos e de sustentar a autotolerância. No entanto, podem ocorrer falhas que resultam em reações contra as células e tecidos do próprio organismo e que causam doenças autoimunes, como a Artrite Reumatóide (AR). Esta é uma doença autoimune caracterizada por artrite simétrica e aditiva, de causa desconhecida, que se inicia geralmente após os 30 anos, acometendo mulheres três vezes mais que em homens, com prevalência de 1,0% em algumas regiões. Nas artrites reumatóides, a membrana sinovial torna-se infiltrada por vários tipos de células inflamatórias, que sinergizam para causar destruição das articulações, provocando fortes dores articulares. O diagnóstico da artrite depende da associação de uma série de sintomas e sinais clínicos, achados laboratoriais e radiográficos. O objetivo do tratamento é aliviar as dores, melhorar ou manter a capacidade funcional, prevenir as incapacidades e melhorar sua qualidade de vida. Ainda não existe nenhum teste que confirme a presença da doença, não há exames laboratoriais considerados específicos para a sua definição diagnóstica. Modelos murinos são eficazes para ampliar nossa compreensão a respeito da artrite humana, como animais da linhagem DBA/1J que apresenta alta susceptibilidade ao desenvolvimento de artrite consequente de imunização com colágeno tipo II. Phage Display é um método de seleção no qual uma biblioteca contendo peptídeos que são expressos na superfície de fagos, com o material genético codificante para cada peptídeo localizado no genoma viral. O direcionamento com peptídeos ligantes à regiões altamente inflamadas são úteis para auxiliar no diagnóstico diferencial, avaliar a extensão da inflamação, determinar o prognóstico e resposta à terapia. Nesse sentido, a busca por novos biomarcadores podem levar a novos métodos para o diagnóstico e tratamento da AR. Essa revisão visa descrever alguns aspectos da Artrite Reumatóide e como a tecnologia de Phage Display in vivo pode ser utilizada na identificação de ligantes à diversos antígenos relacionados à inflamação. CAPÍTULO II: A Artrite Reumatóide (AR) é uma doença autoimune crônica, caracterizadas por inflamação persistente das articulações, sendo os sinais típicos desta inflamação a dor, inchaço e limitação dos movimentos. O termo Artrite se dá a uma inflamação da articulação, de causa pouco conhecida, podendo acometer diferentes articulações. O diagnóstico da AR depende da associação de uma série de sintomas e sinais clínicos, achados laboratoriais e radiográficos. Desta forma, trabalhos que são direcionados a investigar novos biomarcadores tornam-se de grande importância para o diagnóstico da AR. O objetivo deste estudo foi selecionar e identificar por meio da metodologia de Phage Display in vivo, peptídeos ligantes à regiões inflamadas de camundongos DBA/1 sintomatizados com alta inflamação induzida por colágeno tipo II. Para indução da artrite, camundongos de linhagem isogênica DBA/1J foram imunizados com 100ug de colágeno tipo II emulsificado com adjuvante de Freund completo. Para seleção de peptídeos ligantes à regiões inflamadas foi realizado um bioppaning in vivo utilizando uma biblioteca de peptídeos Ph.D.-C7C expressa na superfície do fago filamentoso M13 por três ciclos de seleção, sendo a última realizada com subtração dos inespecíficos utilizando articulações sadias. O DNA dos clones selecionados foi sequenciado, traduzido e os diversos clones foram submetidos aos ensaios de Imunohistoquimica. Dentre os 144 clones sequênciados, 115 apresentaram sequências válidas, dos quais foram identificadas 20 sequências diferentes. As análises de bioinformática demonstraram que não há consenso entre a maioria dos peptídeos selecionados. O ensaio de Imunohistoquimica permitiu a pré-validação de dois clones com potencial biomarcador para o imunodiagnóstico da Artrite Reumatóide.

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