RECUPERAÇÃO E PURIFICAÇÃO DE QUITOSANASE DE Metarhizium anisopliae POR ADSORÇÃO EM LEITO EXPANDIDO

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

25/01/2012

RESUMO

Quitosanases são enzimas que hidrolisam a quitosana, um biopolímero obtido da quitina, resultando em oligossacarídeos com diversas e relevantes atividades biológicas, como atividades anticancerígena, anti-HIV e antioxidante, entre outras. O objetivo do presente trabalho foi recuperar e purificar quitosanases produzidas pelo fungo Metarhizium anisopliae, usando adsorção em leito expandido a partir de caldo fermentado enzimático com e sem clarificação, enfatizando a modelagem na etapa de adsorção. O caldo enzimático utilizado em todos os experimentos foi obtido sempre após 18 horas de fermentação, tempo esse determinado em três cinéticas como o de maior atividade enzimática. Foram obtidos quatro modelos estatísticos a partir da otimização dos resultados experimentais com o planejamento Doehlert. A velocidade superficial foi avaliada em cinco níveis, de 40 a 260 cm.h-1, e o tipo de adsorvente, uma variável qualitativa, em três níveis, com três diferentes adsorventes Streamline (SP XL, DEAE e Phenyl), de acordo com o planejamento Doehlert. Foi desenvolvida uma modelagem da adsorção em leito expandido usando-se um modelo que considera a dispersão axial. Nesse caso, as equações do modelo foram resolvidas usando um programa desenvolvido em FORTRAN. O modelo foi considerado adequado, sendo validado para os adsorventes Streamline Phenyl, SP XL e DEAE. apresentando um alto grau de ajuste entre os dados simulados e os experimentais para esses três adsorventes (95,25, 95,21 e 93,88% na média, respectivamente), e os resultados da análise de sensibilidade estão de acordo com a literatura Os resultados mostraram que é possível purificar quitosanase de Metarhizium anisopliae por adsorção em leito expandido. O fator de purificação variou de 2,2 a 3,2 vezes e o rendimento de 35 a 55%. A atividade enzimática máxima de cada eluição foi aproximadamente de 0,06 U/mL, que é maior ou igual aos valores anteriormente relatados. A massa molecular de cada uma das duas quitosanases purificadas, que foi avaliada por SDS-PAGE, foi aproximadamente 35 e 45 kDa, respectivamente. Além disso, essas duas quitosanases produziram quitooligosacarídeos, demonstrando a ação hidrolítica dessas enzimas.

ASSUNTO(S)

bioquimica quitosanase biosseparação adsorção em leito expandido planejamento doehlert modelagem simulação.

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